HIS镍柱纯化方法.docVIP

纯化前准备 推荐在中性至弱碱性条件下（pH 7-8）结合重组蛋白。磷酸盐buffer是常用的缓冲液，Tric-Cl在一般情况下可用，但要注意它会降低结合强度。 避免在buffer中包含EDTA或柠檬酸盐等螯合剂。 若重组蛋白以包涵体形式表达，在所有的buffer中添加6 M盐酸胍或8 M尿素 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如：NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原； 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失； 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%（v/v） 缓