基于ITS序列分析的外生菌根真菌的分子鉴定研究.pdfVIP

包头师范学院 本科毕业论文 题 目 ： 基 于 ITS 序 列 分 析 的 外 生 菌 根 真 菌 的 分 子 鉴 定 研 究 学 生 姓 名 ： 梁 佳 楠 学 院： 生 物 科 学 与 技 术 专 业 ： 生 物 技 术 班 级 ： 2014 级 生 物 技 术 指 导 教 师 ： 赵 艳 玲 副 教 授 二 〇 一 八 年 五 月 摘 要 本实验是利用采自内蒙古贺兰山的外生菌根真菌子实体作为研究对象，通过常 规 CTAB 法对该子实体进行基因组 DNA 提取，并利用真菌特有的引物 ITS1F 和 ITS4 对特异的 DNA 片段进行 PCR 扩增，将扩增产物在浓度为 1%的琼脂糖凝胶中电泳进行 检测，并在紫外透射反射分析仪下观察检测的结果，对于较好的扩增产物利用回收 试剂盒进行纯化，后将纯化产物送由上海生工进行 DNA 测序，将测序所得到的序列 输入 GeneBank 数据库中的局部相似性查询（Basic Local Alignment Search Tool,BLAST)程序进行比对，列出数据库中与所测得到的序列同源性较高的序列信息 并进行分类鉴定，然后运用软件 raxmlGUI 进行系统发育树构建。最终的研究结果显 示该菌种属于报道的 choiromyces helanshanensis。 关键词：外生菌根真菌；ITS 序列；分子生物学；鉴定 Abstract In this experiment, an ectomycorrhizal fungi collected from Helan Mountain, Inner Mongolia, was used as the research object. The extraction of genomic DNA of the fruiting body of ectomycorrhizal fungi was carried out by the conventional CTAB method. The specific primers ITS1F and ITS4 were used to amplify the specific DNA sequences by PCR amplification. The amplified products were tested by electrophoresis with a 1% agarose molecular biology grade gel, and the results of the gel were observed under the ultraviolet transmission reflectance analyzer. The better amplification products were purified by using a recovery kit. Then, the purified products were sent to Shanghai Shenggong for DNA sequencing. The sequence obtained by sequencing was input into the Basic Local Alignment Search Tool(BLAST) program in the GeneBank database for comparsion. In the database, find out the sequences with higher homology with the sequenced sequences and perform the classification and identification. The phylogenetic tree was constructed by using the software raxmlGUI. The final