实验技术路线.pptxVIP

技术路线12小时后做纵切切片，利用GAFP抗体和纤连蛋白抗体做免疫染色同时在损伤位点以下2mm注射反向示踪剂生物胞素判断胶质斑痕的位置与大小是否符合对损伤后的斑马鱼进行解剖，观察扫描处的脊髓及周围组织的损伤情况5小时后通过行为学软件分析损伤后的运动能力，判断损伤程度14dpf 幼年斑马鱼0.033%MS222麻醉双光子激光建立斑马鱼脊髓损伤模型的探索：明场下对脊髓定位，利用双光子强激光对脊髓进行深度扫描切割损伤12小时后做纵切切片，利用生物胞素抗体做免疫染色判断损伤的位置与大小是否与符合前期实验：手术建模：手术组（n=68）假手术组（n=68）建模成功性分析：每周分析术后运动能力，连续跟踪7周取脊髓（损伤位点以下1cm）：术后4hour, 12hour, 6day, 11day组定量PCR：提总RNA反转录检测sema4e和plxnd1 相对内参GADPH表达水平的变化原位杂交：制作切片制作探针检测sema4e和plxnd1 mRNA的表达水平变化及表达细胞Westen Bolt：提总蛋白检测sema4e和plxnd1蛋白表达水平的变化基因芯片分析：提总RNA分析全部基因的表达水平，统计分析各个基因表达变化sema4e与plxnd1关系研究：sema4e活性片段DNA的扩增sema4e表达载体的构建表达载体的导入sema4e特异性肽段的设计与合成转染细胞的筛选与培养噬菌体展示技术淘