石蜡切片法课件.ppt

显 微 制 片 技 术 ——石蜡切片法 实验安排 3月6 （周二）：取材。 3月20（周二）：漂洗、脱水、浸腊。 4月 3（周二，可能改为3月31日，周六）： 包埋、切片。 4月17（周二）：染色。 5月15（周二）：拍照。 5月29（周二）：总结、交报告、参观电镜室。 在显微镜下观察组织内部的细微结构之前，必须根据组织材料的特性，采用不同的方法进行处理，把材料制成透明的玻片标本。 石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。 石蜡切片法的一般流程为：取材→固定（抽气）→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片。  取 材 用锋利的刀片切取组织，选定适宜的材料，取材料要新鲜。动作要迅速、准确，以免挤压损坏组织；取病理材料时，应设置对照材料，所取材料大小要适当。 固 定 将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中。借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止，并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化。从而达到使组织变硬从而便于切片、增强内含物的折光度、令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用。以新鲜配制固定液效果较好。固定的时间依材料的种类、性质、大小等而定。材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上标签。 良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。 固定时间不能过短，否则组织内部不能很好固定。一般数小时或几天。 常用固定液 ⑴ 乙醇 为凝固型固定剂。常用无水乙醇或95％乙醇。 ⑵ 甲醛 为非凝固性固定剂。具强烈刺激性气味。纯净的甲醛为无色透明液体。固定用的浓度为4%-10％。 ⑶ 醋酸 为凝固型固定剂。为无色透明的液体，刺激性极强，低温下凝结成冰，故又名冰醋酸。 混合固定液：由几种试剂，适量配制而成。混合遵循原则：① 优缺点互补；② 膨胀与收缩相互平衡；③ 强氧化剂与还原剂应分别配置。 FAA 固定液（福尔马林－冰醋酸－乙醇） 福尔马林 5ml 冰醋酸 5ml 70%酒精 90ml 抽气：多数情况下可以省略，如组织块较小，但肺组织含有空气，漂浮在固定液上，导致固定液不能完全深入。需要抽气。可以用针筒或电动负压抽气，肺组织抽气时候，有时需要抽气、放气多次才能使组织块浸泡到固定液中。 注意事项 1、动作要轻柔、准确、迅速。必要时组织取下在固定液中切成小块。 2、固定液与组织块比例大约为10：1～2，尽量少带血液或组织液。 洗 涤 固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶，影响观察；有的还会继续作用，使材料变质等。因此，在使用材料时，需根据固定液的种类，用水、缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液。如：用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次。 脱 水 材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分解。而且透明剂与水是不相混合的，不利于材料的透明和包埋等后期处理。因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分，以便让石蜡渗透进细胞。所以，脱水是制片的关键环节。脱水剂要求能与水混合，而且能与其他有机溶剂互相替代。 常用梯度酒精（30%，50%，70%，90%，100%酒精）脱水，脱水时间一般10分钟～60分钟，一般组织较致密、组织块较大，脱水时间要延长。有时100%酒精需要更换2 ～3次。 透 明 组织脱水后，还需要经过一种既能与脱水剂相