实验九十酶联免疫吸附试验.pptxVIP

实验九 酶联免疫吸附试（ Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）;实验目的;实验原理;实验原理;实验原理;实验原理;ELISA-间接法;用于抗原及半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。 以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体上，加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原，使二者竞争地与固相抗体结合，经过洗涤分离，最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。;ELISA-双抗体夹心法;实验材料;夹心法检测HBsAg方法 ;酶：辣根过氧化物酶(HRP) 底物：3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺（TMB） 在辣根过氧化物酶催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物。使用2M ?H2SO4终止反应，在450nm测定吸光度。;结果判断 ;实验报告;实验十 IgG的分离和纯化;实验目的;实验原理;血清蛋白质：复杂混合物。 1、白蛋白、a1、a2、β球蛋白，纤维蛋白原，凝血酶原和其它凝血因子等均由肝细胞合成。 2、γ球蛋白主要来自浆细胞。 免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中。 免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。;一般pH7.0时，50％硫酸铵饱和度可将所有的5种Ig（球蛋白）沉淀出来。33％饱和度大部分IgG可沉淀出来。 意义：制备出的纯化IgG，可用于酶标抗体或荧光抗体的制备。 ;实验器材;实验步骤;实验报告;实验