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核算及蛋白质检测技术 核算及蛋白质检测技术 核酸的凝胶电泳: 1. 基本原理： 生物大分子在一定pH 条件下，通常会带电荷。将其放置到电场中，就会以一定的速度移向适当的电极。分子在电场作用下的迁移速度，与电场强度和电泳分子所携带的净电荷数成正比，与分子的摩擦系数成反比。摩擦系数是分子大小、极性及介质粘度的函数。根据分子大小、构型或形状的差异和带净电荷数，可通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离。 在生理条件下，核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团，呈离子化状态，DNA 和RNA 多核苷酸链称为多聚阴离子，把它们放置在电场当中，会向正电极的方向迁移。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA 几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正电极方向迁移。在一定的电场强度下，DNA 分子的迁移速度，取决于核酸分子本身的大小和构型。这就是应用凝胶电泳技术分离DNA 片段的基本原理。 琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖是一种线性多糖聚合物。将琼脂糖粉末加热到熔点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质。经过化学修饰的低熔点琼脂糖，在较低的温度下便会熔化，常用于DNA 片段的制备电泳。 琼脂糖凝胶分辨DNA 片段的范围为0.2～50kb 之间; 聚丙烯酰胺凝胶分辨范围为1～1000bp 之间。凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔