1DNA重组技术的基本工具.pptxVIP

生物选修3现代生物科技专题;目 录;专题1 基因工程; 是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋 予生物以新的遗传特性，从而创造出更符 合人们需要的新的生物类型和生物产品。;基因工程的别名;二、基础理论和技术的发展催生了基因工程;技术发明使基因工程的实施成为可能 1.基因转移载体的发现 2.工具酶的发现 3.DNA合成和测序技术的发明 4.DNA体外重组的实现 5.重组DNA表达实验的成功 6.第一例转基因动物问世 7.PCR技术的发明;基础理论和技术的发展催生了基因工程;小飞守角制作;小飞守角制作;小飞守角制作;专题1 基因工程;小飞守角制作;转基因抗虫棉;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;基因工程培育抗虫棉的关键步骤：;小飞守角制作;准确切割DNA的工具—— “分子手术刀” DNA片段的连接工具—— “分子缝合针” 基因转移工具—— “分子运输车”;思考：; 原核生物很容易受到自然界中外源DNA的入侵，但 是长期的进化过程中，这些原核生物却没有因为外源 DNA的入侵而灭绝。 根据我们刚刚掌握的知识，你能推测这其中的原因 吗？;一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀”; 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ）能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。 SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。;G A A T T C ;切割DNA分子时产生的两种不同末端; 限制酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？;什么叫黏性末端？;什么叫平末端？;;4、切割后的形式：2种末端;要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;思考与探究;限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;;小飞守角制作; T;磷酸二酯键 即脱氧核糖、磷酸之间的连接;演示;;DNA连接酶── “分子缝合针”;二、DNA连接酶——“分子缝合针”;G A A T T C ;;DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点;DNA连接酶和 DNA聚合酶的异同;;; 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？;2、种类：;③类型：;例、阅读课本P5，图1—4，回答下列问题： ⑴EcoR I是一种 酶，其识别序列是 ，切割位点是 与 之间的 键。切割结果产生的DNA片段末端形式为 。 ⑵不同来源DNA 片段结合，在这里需要的酶应是 连接酶，此酶的作用是在 与 之间形成 键而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是 。;DNA连接酶——“分子缝合针”;三、基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车”;三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”;假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？不能分离会怎样？ ;假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？;目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ ;2.作用：将外源基因导入受体细胞;作为载体的必要条件;1）载体DNA 必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，才不至于因目的基因的插入而失活。 2）载体DNA 必须具备自我复制能力，或整合到受体染色体DNA 上，随染色体DNA 的复制而同步复制。 3）载体DNA必须有标记基因，以便重组后进行筛选。 4）载体DNA 必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和体外操作。;4.载体的种类：;质粒;基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”; 目的基因的检测和表达;模拟操作：重组DNA分子的模拟操作;练习：;3、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A．限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱 基序列 B．EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子， 只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中;4、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在