14.3生物质谱技术.pdfVIP

生物质谱技术 概述  20世纪80年代产生的新的软电离方式，使得质谱能用于分析高极性、难挥发和 热不稳定性生物大分子成分可能；  电喷雾电离(Electrospray Ionization ，ESI)和基质辅助激光解吸电离(Matrix- Assisted Laser Desorption Ionization, MALDI) 等在基因组学与蛋白质组学 方面已得到了广泛的应用； 生物质谱仪 现用于单核苷酸多态性研究的生物质谱仪主要有如下两种：  电喷雾电离源--四极杆质量分析器 （ESI-Q-MS ）  基质辅助激光解吸电离源--飞行时间质量分析器 （MALDI-TOF- MS ） 特点 生物质谱用于SNP检测的优点： （1 ）准确 检测的是核酸的分子量（准确地讲是荷质比） （2 ）快速 获得一个质谱图只需要几秒钟 （3 ）高通量，耗费少 可同时检测多个位点 （4 ）易于自动化 生物质谱的应用领域 （1 ）蛋白质和多肽的分析 （2 ）多糖结构测定 （3 ）寡核苷酸和核酸的分析 （4 ）药物代谢 （5 ）微生物鉴定 （6 ）其他 ：医用材料如人工血等研究 MALDI TOF/TOF 4800 A B C D MALDI-TOF MS 工作原理 A.离子化区：生物分子和基质形成共结晶，在脉冲激光照射后发生离子化 B.电场加速区：离子束在电场中被加速，经过无电场的漂移管以不同的速度到达检测器 C.质量分析器（质谱） D.信号处理 单核苷酸多态性分析 • 单核苷酸多态性分析是由两个步骤组成特异性产物 ，然后对 此产物进行分析； • 生成等位特异性产物方法有4种： 引物延伸 杂交 酶切 链接反应 单核苷酸多态性分析  引物延伸反应使用最广泛;  引物延伸反应 ：通过PCR将DNA进行扩增，然后立即与一条延伸引物在紧挨 多态性位点的上游退火，dNTPs ，ddNTPs和聚合酶也被加入反应体系中。延 伸反应在多态性位点或多态性位点的下一个碱基终止;  引物延伸反应的产物由于延伸的碱基不同 ，分子量不同 ，经过MALDI-MS分 析后即可区分SNP; 单核苷酸多态性分析 Mass ARRAY分子量阵列系统结合了引物延伸反应和MALDI-TOF质 谱技术,采用质谱法直接检测SNP;实现高通量多重SNP分析; 每块芯片上可以进行384个客户样本×15个SNP位点的分型检测，能确 保每天实现70000 个SNP基因分型的高通量筛选检测。 A.PCR扩增 B. 引物延伸反应 延伸引物设计在紧 挨多态性位点的上游 C. MALDI-TOF质谱检测延伸反应 的产物 引物延伸反应--MALDI-TOF实现SNP检测