2021年初级检验技师微生物检验讲义第章立克次体及检验.docVIP

立克次体及检查 　　　　本章要点：　　1.概述　　2.致病性　　3.立克次体检测办法 　　　　一、概述　　1.概念：立克次体是一类微小原核细胞型微生物。　　2.立克次体共同特性：　　大多是人畜共患病原体；以节肢动物为传播媒介或储存宿主；大小介于普通细菌与病毒之间，革兰染色阴性，呈多形性；除很少数外均专性活细胞内寄生；对各种抗生素敏感。　　3.分类　　对人类致病立克次体有五个属：立克次体属（Rickettsia）、柯克斯体属、东方体属、埃立克体属和巴通体属。　　4.外斐反映　　立克次体耐热多糖抗原与变形杆菌某些X株菌体抗原（OX19、OX2、OXK抗原）具备共同抗原性，因而临床上惯用后者代替相应立克次体抗原进行非特异性凝集反映，这种交叉凝集实验称为外斐反映，用于立克次体病辅助诊断。 　　　　二、致病性　　（一）立克次体斑疹伤寒群重要涉及普氏立克次体和莫氏立克次体。　　1.普氏立克次体　　常以人体虱为传播媒介，通过虱粪擦入损伤皮肤，引起人与人之间传播流行性斑疹伤寒。　　2.莫氏立克次体　　莫氏立克次体贮存宿主是鼠类，重要传播媒介是鼠蚤或鼠虱，通过蚤粪擦入损伤皮肤，引起地方性斑疹伤寒。　　3.恙虫病立克次体通过恙瞒幼虫叮咬传给人，引起恙虫病。　　4.贝纳柯克斯体（又称Q热立克次体）　　以蜱为传播媒介，也可不借助于媒介节肢动物而通过接触、呼吸道、消化道等途径传给人，引起Q热。　　5.汉赛巴通体　　为杆菌性血管瘤-杆菌性紫瘫和猫抓病病原体，与猫抓伤、咬伤关于。 　　　　三、立克次体检查　　由于立克次体传染性较强，病原体分离鉴定必要保证在安全防护条件下进行，以防止实验室感染发生。　　（一）标本采集和解决　　1.患者血液　在病程第一周内并在使用广谱抗生素前采集患者血液5～10ml，及时在患者床边接种于动物。血清学检查标本普通采集3份血液标本，分别取自病程初期、病后10～14d及病后21～28d。如患者已使用抗生素治疗，因抗体产生较晚，故需采集第4份标本。　　2.活检或尸检材料　组织标本研磨制成10%～20%悬液，低速离心取上清接种，若标本有细菌污染，可加青霉素（100～l000IU／ml）置室温作用30min后接种动物。　　（二）标本直接检查　　1.立克次体染色法多用于脏器标本检查。标本印片、固定后用荧光抗体染色或常规染色镜检。必要时作切片检查。　　2.核酸检测 采用PCR技术和核酸探针检测。　　（三）立克次体培养法　　1.鸡胚卵黄囊培养或细胞培养。　　2.动物接种惯用动物有豚鼠、金黄地鼠、小白鼠、大白鼠及家兔等。　　（四）血清学实验　　血清学实验是研究立克次体重要办法，也是立克次体病实验诊断和鉴定病原体重要手段。患者双份血清实验成果，有助于立克次体病现症诊断。　　1.间接免疫荧光（IFA）实验、ELISA间接法是当前检测标本中特异性抗体惯用办法。间接微量免疫荧光技术办法敏感，重复性好，又节约材料和时间，因而在血清学诊断及立克次体种别鉴定上广泛应用。单份血清滴度≥1：128者有现症诊断意义，普通滴度在1：16或以上即为阳性，4倍增长可作为立克次体病现症诊断。　　补体结合实验虽特异，但敏感性不如IFA和ELISA且操作繁琐，除Q热诊断外，此法已多被前两者取代。　　2.凝集实验　分为特异性凝集和非特异性凝集实验两种，详细办法如下：　　特异性凝集实验：微量血凝实验、间接血凝实验、乳胶凝集实验。微量血凝实验以血清最高稀释度呈凝集者为其滴度，达1：8以上者为阳性。间接凝集实验滴度在1：50以上有诊断价值。乳胶实验成果与间接血凝成果相吻合。 　　非特异性凝集实验：外斐实验惯用于立克次体属三个生物型诊断，缺少敏感性和特异性。　　普通血清滴度达1：160即为阳性，病程中双份或多份血清实验，至少效价有4倍增长才有诊断意义。　　　　　　四、斑疹伤寒立克次体　　（一）生物学特性　　1.形态与构造 斑疹伤寒立克次体比细菌小，呈多形性，有球形、球杆状、长杆状或长丝状。在感染细胞内大多汇集成团分布在胞浆内。细胞壁不含磷壁酸，但具有胞壁酸、葡萄糖胺和二氨基庚二酸，与革兰阴性菌肽聚糖成分相似。斑疹伤寒立克次体最外表具有黏液层和微荚膜构造。　　2.培养特性 采用鸡胚成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞进行分离培养，繁殖一代需要6-8小时，培养时需要CO2。　　3.抗原构造 立克次体有两种特异性抗原，一种为群特异性抗原，与黏液层脂多糖关于；另一种为种特异性抗原，与细胞壁外膜表面蛋白成分关于。大某些立克次体与普通变形杆菌某些X菌株耐热多糖抗原有共同抗原性，故可用这些X菌株代替立克次体抗原进行非特异性凝集反映去检测抗体，这种交叉凝集实验称为外斐反映（Wiel-Felix reacti