氯化物检测结果及存在问题.docVIP

氯化物检测结果及存在问题 磷酸氢二钠《2015版药典》质量标准中氯化物的检测用的是浊度法，由于可能存在干扰离子，影响氯离子的检测，需要开发新方法来准确检测氯离子的含量。现在已经尝试过的检测方法有：蒸发光检测和离子色谱检测，检测结果及存在的问题汇总如下： 1.蒸发光 最优方案： 流动相：乙腈：20mmol/L乙酸铵水溶液=10：90，等度洗脱。 柱温：35°C 流速：1.0mLmin 色谱柱：SB-C18，4.6mm*250mm,5μm，Agilent。 蒸发光检测器参数：雾化器温度：50°C，漂移管温度：90°C，载气流速：1.0mL/min。 Cl-出峰时间3.260min，PO43-出峰时间3.175min，分离效果很差，Cl-和PO43-在0.15mg/ml和0.25mg/ml时，分离度仅为0.71，供试品中均未检测到Cl-峰，可能被高浓度PO43-包裹或者由于检测限达不到要求，检测不出来。图1为参考文献中无机离子干扰试验色谱图。分离度未达标的原因可能是缺少参考文献中的色谱柱Merck ZIC?-HILIC柱（硅胶基质，两性离子液相色谱柱，4.6mm×250mm，5μm），尝试过多种类型的色谱柱和不同体系的流动相，Cl-与PO43-离子的分离度均很差，且Cl-对照品溶液在120μg/ml(按限度10ppm来算，对应的磷酸氢二钠浓度为12g/ml)时信噪比196.7，在6μg/mL（对应的磷酸氢二钠浓度为0.6g/mL）未检出，响应过低，由于氯离子的限度为10ppm,导致磷酸氢二钠供试品浓度过大，不能进液相色谱柱分析（文献中Cl-定量限做到0.021mg/mL）。 图1 无机离子干扰试验色谱图 存在的问题：Cl-与PO43-分离度达不到，且Cl-响应过低。 2.离子色谱 最优方案： 淋洗液：KOH溶液 抑制电流：57mA 色谱柱：IonPac AS18，5mm*23mm 柱温：30°C，检测器温度：35°C 流速：1.0mL/min，梯度洗脱： 时间(min) KOH浓度/(mmol/L) 0 8 8 8 18 23 23 23 Cl-出峰时间7.02min，PO43-出峰时间12.5min，分离度好，0.05μg/ml时信噪比为395，响应很高，跟文献数据重合度较高，图2为文献中做的阴离子干扰试验图： 图2 阴离子干扰试验色谱图 存在的问题：磷酸氢二钠供试品会降低氯离子的响应，在氯离子对照品浓度为0.05μg/mL时，氯离子能正常出峰，在氯离子加磷酸氢二钠溶液中，50%回收率，100%回收率，150%回收率溶液均未有氯离子检测出来，加标0.1mg/L氯离子回收率溶液，在8mim中出有峰出现，偏离对照溶液氯离子1min，原因疑为高浓度氯离子与磷酸氢二钠的影响，导致氯离子出峰时间有所改变。 解决方法：增加一根氯离子富集柱（IonPac TAC-ULP1，5mm*23mm，药物研究院已有），富集磷酸氢二钠中的氯离子，去除磷酸氢二钠的影响。要达到痕量检测氯离子，还需要一个十通阀和六通阀组合使用，药物研究院现只有两个六通阀组合使用，还需购买一个十通阀，价格2万元/个。下图为十通阀与六通阀组合使用图和进样时的流程表，与工程师沟通后确认不可将十通阀替换成六通阀。 3.结论：推荐使用离子色谱来做氯离子的准确检测，检测限能达到要求，分离度好。不过由于只能选择性富集一种离子，可能无法同时检测其他干扰离子，如果能确定干扰氯离子检测的其他阴离子，就可以针对性的用离子色谱来定量或者定性的检测其他离子。