基因工程工具酶.ppt

基因工程的有力工具—酶;基因工程中常用的工具酶;第二章 基因工程工具酶;第一节 限制性核酸内切酶;1、宿主的限制和修饰现象; 1、宿主的限制和修饰现象;宿主控制修饰 在这些稀有的由λ（B）形成的噬菌斑中的噬菌群体，则已经发生了某些变化。用这些变化了的λ（B）噬菌体再感染B菌株，它们就可以在B菌株上有效地生长。如此由第二个寄主菌株（大肠杆菌B株）赋予λ噬菌体的这种非遗传化，使得它再感染时能够有效地生长，而没有再次受到限制的现象，称之为修饰。 无论是限制还是修饰，都是由寄主控制的，我们统称为寄主控制的限制与修饰现象。;?(B);1.1 限制（Restriction） ;1.2 修饰（Modification） ;1.3 限制与修饰现象意义;第一节 限制性核酸内切酶;2 限制性核酸内切酶的类型;2.2 限制性核酸内切酶的分类;它的显著特点：是能识别DNA分子中特定的核苷酸序列，但切割作用却是随机进行的，一般在距离识别位点上千碱基对以外的随机位置上切割，不产生特异片段。因此，I型限制性核酸内切酶在基因操作中没有实用价值。;2.2.2 Ⅱ型限制性酶;2.2.3 Ⅲ 型限制性酶;三类限制性核酸内切酶比较;第一节 限制性核酸内切酶;3、限制性核酸内切酶的命名;3 如果一种特殊的寄主菌株具有几个不同的限制修饰体系，则用罗马数字标出，比如Eco R I、 Hind Ⅲ。 4 所有的限制酶，除了以上名称外，前面还冠以系统名称。限制性核酸内切酶的系统名称为R，甲基化酶为M。例如R.HindⅢ表示限制性核酸内切酶,相应的甲基化酶用M.HindⅢ表示。但在实际应用中，尤其是在上下文已交代得很清楚时，限制性内切酶的系统名称R常被省略。;属名 种名 株名;命名举例2;第一节 限制性核酸内切酶;4 Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性;7bp：Ppu MⅠ RG GWCCY 8bp：Not Ⅰ GC GGCCGC R= A or G Y= C or T M= A or C K= G or T S= C or G W= A or T H= A or C or T B= C or G or T V= A or C or G D= A or G or T N= A or G or T ;（1）回文对称 4 6 8 5 7 Eco RⅠ G AATTC CTTAA G Hind Ⅲ A AGCTT TTCGA A;（2）非对称 AccBS Ⅰ CCG CTC（-3/-3） BssS Ⅰ C TCGTG GAGCA C ;（1）内部 大多数 AccBSⅠ CCG CTC（-3/-3） GGC GAG 　　 AaaaⅠ NNNN NN（-2/-4） NN NNNN （2）两端 EcoRⅡ CCWGG Sau3AⅠ GATC NlaⅢ CATG;（3）两侧 BcgⅠ （10/12）CGA（N）6TGC（12/10） （N） 10 CGA（N）6TGC（N）12 （N） 12 GCT（N）6ACG（N）10 TspRⅠ CASTGNN/ NNCAC（G）TGNN NNGTG（C）ACNN;4.4 限制性内切酶产生的末端;非对称突出端（相同） （1） 来自非对称识别序列