细胞复苏离心.docVIP

材料】1.??常规细胞培养仪器设备 恒温水浴振荡器。2.??培养液(DMEM)胎牛血清(CBS)二甲基亚砜(DMSO)【操作程序】1.??细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。2.??培养液(DMEM)、0.25％胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱370C预热20min，备用。3.??二甲基亚砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，备用。4.??从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。5.??将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心(1000r/min，5min)。6.??用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。7.??记录复苏日期。【注意事项】1.??取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。2.??冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO)对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)最好选择进口产品。3.??离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。4.??离心问题：