靶向介导的旁分泌相互作用用于胰腺癌的治疗和监测培训.pptxVIP

靶向LIF介导的旁分泌互作用于胰腺癌的治疗和监测 1 汇报人：药文通 2021年8月4日 目录 前言 一、前言 1.1 作者简介-田瑞军 职位：南方科技大学化学系终身教授，博士生导师，加拿大渥太华大学医学院及深圳市人民医院兼职教授，中国蛋白质组组织CNHUPO常务理事、中国化学会色谱专业委员会理事、中国质谱学会理事和中国分子系统生物学学会理事，科技部“国家重点研发计划”蛋白质机器专项子课题负责人。 研究方向：基于液相色谱与质谱联用系统的蛋白质组学新方法和新技术等 其中以责任作者在Nature、PNAS、Mol. Cell. Proteomics、Anal. Chem.、Angew Chem.等上发表文章40余篇，作为客座主编发表专刊一部，SCI他引2000余次，H-index为27 (Google Scholar) 图片来源南方科技大学官方网站） 一、前言 1.2 研究背景 胰腺癌被称为“癌症之王”，目前，由于胰腺癌既没有有效的靶向药，也没特异的标志物可辨认，患者被确诊时，通常就已经进入中晚期，且大部分已经发生转移扩散。胰腺癌由于一直被包裹在一个“保护层”中（即被星状细胞（PSC）等间质细胞及其分泌的胞间基质所包裹），这些间质细胞形成的屏障，既保护癌细胞免受化疗药物和免疫监控的攻击，从而产生严重的耐药性，又掩盖了很多癌细胞的信号和生理副反应，从而大大减弱了其生理性症状，增加了疾病的检测难度。 一、前言 1.2 研究背景 研究者发现，胰腺肿瘤微环境的间质细胞层主要由PSCs组成，其在胰腺癌（PCCs）发生发展过程中不断增多，晚期胰腺肿瘤中的占比可高达90%，从而形成了明显的肿瘤组织纤维化，以致胰腺癌肿瘤形貌显白色且坚硬。PSCs和PCCs（pancreatic cancer cells）彼此间的相互作用不仅会加强肿瘤进程和转移性，同时也维持了他们自身的活性，使得肿瘤进程加剧、抗药性增强。。 另外，星状细胞的激活始于胰腺癌发生的早期，故而潜在地可以为临床检测提供灵敏且丰富的蛋白因子。尽管星状细胞与癌细胞间相互作用的重要性已被证实，但是具有显著生理性功能的介导这一胞间通信的分泌因子尚未被发现。因此在该项目启动伊始，研究者就期望通过蛋白质组学策略寻找介导胰腺癌星状细胞和癌细胞间信号转导的关键性分泌因子，并且他们也确实发现LIF这一关键分泌因子。 一、前言 1.3 技术手段 开发了应用于研究肿瘤微环境中细胞间信号转导的整合蛋白质组学分析策略，通过系统性地集成磷酸化蛋白质组学、分泌蛋白质组学和蛋白相互作用组学策略，对源于星状细胞的分泌因子及其作用于癌细胞引起的胞内信号转导通路的变化进行系统解析，发现了这种分泌因子(LIF)。并通过采用多中心（中国和美国）和多种类型检测手段—靶向性质谱和高灵敏度ELISA（simoa）相结合的方式，研究者对大量临床组织样品的定量分析，证明LIF作为胰腺癌生物标志物的可行性。 为了准确地评估LIF在胰腺肿瘤微环境中的生理功效，通过遗传学手段选择性敲除胰腺癌小鼠模型中LIF的受体膜蛋白LIFR，以阻断LIF对癌细胞的潜在效应。然后通过不同的给药处理，观察患癌小鼠的生存周期，评价LIF作为胰腺癌临床靶标的可行性。 二、研究方法 2.1 研究模型 细胞模型： ①胰腺癌细胞系：AsPC1 (CRL-1682), BxPC3(CRL-1687), CFPAC1 (CRL-1918), MIA PaCa2 (CRL-1420), PANC1 (CRL-1469) , BJ fibroblasts (CRL-2522), KP4 (JCRB0182）； ②胰腺星状细胞系：hPSC, ONO , YAM1； ③成纤维细胞：Normal human fibroblast 细胞系； ④Lifr基因敲除细胞系：MEF 细胞系。 动物模型： ①复合突变小鼠：KrasLSL-G12D/+;Trp53flox;Rosa26LSL-Luc（KPf/fL） ②Pdx1-Cre mice与KPf/fL回交至少6次； ③C57BL/6N-Lifrtm1a(EUCOMM)Hmgu/H小鼠的精子并在体外受精获得敲除了第一等位基因的突变小鼠（tm1a）,然后与FLPo mice（Gt(ROSA)26Sortm2(FLP∗)Sor/J）杂交，删除FRT-LacZ-Neo-FRT并转化成具有条件等位基因的Lifrflox (tm1c)个体，没有表型差异的标记为Lifr+/+ 和 Lifrf/+ 小鼠（文章标记为Lifr WT）。 人体模型： 胰腺癌组织冷冻标本、血清或血浆均为鉴定样本。 二、研究方法 2.2 细胞水平研究 二、研究方法 肿瘤细胞筛选 Flow cytometry 组织病理研究 IF，HE 2.3 蛋白水平研究 二、研究方法 磷酸化蛋白