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植物组织培养一些注意事项1 植物组织培养一些注意事项1 PAGE / NUMPAGES 植物组织培养一些注意事项1 植物组织培养的一些注意事项 一、常用培养基主要特征 1、高盐成分培养基包含 MS、 LS、BL、BM、 ER 等培养基。此中 MS 培养基应用最 宽泛 , 其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高 , 微量元素种类齐备 , 其养分数目及比 例均比较适合 , 宽泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。 LS、 BM、 ER 培养基由 MS 培养基演变而来。 、硝酸钾含量较高的培养基包含 B5 、N6 、 LH、GS 等培养基。 B5 培养基 B5 培养基除含有较高的钾盐外 , 还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素 , 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。 ② N6 培养基 N6 培养基 ( 朱至清等 1975 ) 系我国学者创建 , 获国家发明二等奖 , 合用于票据叶植物花药培养 , 柑橘花药培养也适合 , 在楸树、针叶树等的组织培 养中使用成效也好。 ③ SH 培养基是 矿盐浓度较高的一种培养基 , 此中铵与磷酸是由磷酸二氢铵 ( NH4 H2 PO4 ) 供给的 , 这种培养基适合于某些票据叶及双子叶植物的培养。 、中等无机盐含量的培养基 H 培养基本培养基大批元素约为 MS 培养基的一半 , 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低 , 微量元素种类减少 , 而含量较 MS 为高 , 维生素种类比 MS 多。适于花药培养。 ②尼奇培养基 (Niotsch 1969 ) 此培养基与 H 培养基成分基真同样 , 仅生物素比 H 培养基高 10 倍。也适合于花药培养。 ③米勒培养基 (Miller 1963 ) 此培养基和 Blaydes(1966) 培养基两者成分完整 同样。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。 4 、低无机盐培养基大多状况下用于生根培养基。有以下几种 : ①改进怀特培养基 (White 1963 ) WS培养基 (Wolter Skoog 1966) ③克诺普液 ( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液 (Berthelot 1934) HB 培养基 ( Holley Baker 1963)此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎 尖培养中成效优秀。其成分是大批元素比 1/ 2 克诺普 ( Knop ) 液稍多 , 微量元 素用贝尔什劳特液 , 每升培养基中加 0 . 5ml 。 二、与培养基有关的一些细节问题 1、培养基所用药品应采纳等级较高的化学纯 CP(三级 ) 及分极纯 AR(二级 ) , 以 免杂质对培养物造成不利影响。 2、调理 PH也可用精细 pH试纸 ( 应在干燥器中保留 , 免得吸湿而无效 ) 。培养基过 酸的可用 1mol/ L 氢氧化钠 ( NaOH) 来调理 ; 培养基过碱的可用 1mol/ L 盐酸 ( HCl ) 来调理 ( 1mol/ L NaOH 的配制方法是称 40gNaOH, 溶解后加入蒸馏水 , 定容到 1 000ml 即可。 1mol/ L HCl 的配制方法是量取 12mol/ L HCl 84ml , 加 水定容至 1 000ml) 。经高压蒸汽灭菌后 , 因为某些成分的分解 ( 如蔗糖的分解 ) 或氧化 , 酸度会增添 ( pH 值一般可降低 0 . 2 ) 。有时玻璃器皿质量较差 , 此中 一部分物质溶解 , 也会影响酸度的变化。这些在调整 pH 值时都要考虑进去。分 装后应立刻灭菌 , 若因故不可以实时灭菌 , 最好放入冰箱中在 24h 内达成灭菌工 作。灭菌时压力表读数为 0 . 8kg/ cm 2 ～1 . 1kg/ cm 2 , 121 ℃时保持 15min～ 20min 即可。 3、某些生长调理物质 , 如吲哚乙酸、玉米素及某些维生素等物质遇热不稳固 , 所以不可以进行高压灭菌 , 而需用过滤方法灭菌 , 经过滤灭菌的溶液 , 可在琼脂培养基温度降落到大概 40℃时加入到已高压灭菌的培养基中。 4、配好的培养基可放到培养室中预培养 3d , 若没有污染反响 , 则证明是靠谱的 , 能够使用。临时不用的培养基最好置于 10℃下保留 , 含有生长调理物质的培养基 在 4℃～ 5℃低温下保留则更理想。 含吲哚乙酸或赤霉素的培养基应在配制一周内用完 , 其余培养基至多也不可以超出一个月。 一般状况下 , 两周内应用完 , 免得干燥变质。 三、培养资料及消毒 1、取材季节的影响：大多半植物应在其生长开始的季节采样 , 生长末期或已进 入休眠期 , 则外植体对引诱反响愚钝或无反响。 2、器官的生理状态和发育年纪：沿植物的主轴 , 越向上的部分所形成的器官其生长的时间越短 , 其生理年纪也越