食用菌遗传学基础与育种技术.pptVIP

食用菌分离技术 （二） 菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 瓶内装有培养基，在25℃下，培养24H。孢子落到培养基上后，取出耳片，塞上棉塞继续培养，然后再转入试管中培养。 ② 钩 悬 法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 1、孢子分离法 (1)孢子弹射分离法 取一小块成熟的菌褶或小块菌盖，用溶化的琼脂或胶水、浆糊(需先灭菌)贴附在试管斜面的上方或培养皿皿盖上，经6—12h，待孢子落下后，立即将试管或培养皿中的培养基移到另一消毒过的空试管或培养皿中进行培养。 ③ 贴 附 法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 1、孢子分离法 (2)菌褶上涂抹法 将伞菌子实体用75％酒精表面消毒，按无菌操作用接种环直接插入两片菌褶之间，轻轻地抹过褶片表面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。 (3)孢子印分离法 取成热子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌褶向下放置于灭过菌的有色纸上，在20-24℃静置一天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在试管培养基上培养。 孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮，当母种定植一星期左右，菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂菌的母种试管，进而转管扩大，一般到栽培种，转管不宜超过5次。 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 1、孢子分离法 ----多孢分离法 孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。一般菌类如平菇、凤尾菇、香菇、金针菇和草菇等，都可用多孢分离法获得母种。 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 1、孢子分离法 (4)单孢子分离法 进行单孢子分离后，在人工控制的条件下，使两个优良品系的单孢于进行杂交，从而培育出新品种。 挑取少许孢子在无菌水中形成孢子悬浮液，取几滴涂于培养基上，用无菌玻璃三角架推平。经48-72h后，镜检孢子萌发情况。在单个孢子旁做好标记，然后将其转接到斜面培养基上，待菌落长到lcm左右时进行镜检，观察有无锁状联合；初步确定是否是单核菌丝。 ① 平 板 稀 释 法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 1、孢子分离法 (4)单孢子分离法 挑取一定量孢子，经连续稀释后，直到每滴稀释液中只有一个孢子，然后滴人试管中保温培养。当发现单个菌落时，转到新试管中继续培养，并通过镜检以确定是否为单孢菌落。 ② 连续稀释法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 2、 组织分离法 组织分离法 是利用子实体内部菌肉组织来获得菌种的一种最简便的方法，是生产上常用的一种分离菌种的方法。 组织分离是一种无性繁殖过程，所得到的菌种是营养后代，后代不易变异，菌株可保持原品种的优良品质。但如采用感染病毒的子实体进行组织分离时，常得到带病毒的菌丝体。 （1）子实体组织分离法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 2、 组织分离法 选择优良的种菇作为分离材料，用无菌水冲洗后，用75%的酒精溶液表面消毒。取消毒过的刀片从菌柄或菌盖中部纵切、撕开，挑取菌盖与菌柄交界处的一小块组织(火柴头大小)，接种到PDA培养基上3-5天后，接种块上产生白色绒毛状菌丝。 （1）子实体组织分离法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 2、 组织分离法 2、组织分离 ①伞菌组织分离法 组织分离时，用75%酒精棉球擦拭双手及接种工具。点燃酒精灯， 将尖头镊子烧灼灭菌；随后将种菇纵向撕成两半，于菌柄、菌肉 交界处切取火柴头大小的组织块，迅速抖落到试管中，烧灼管口 及棉塞，塞上棉塞。这些操作都是在酒精灯火焰无菌区域进行的。 一种方法是将耳片反复用无菌水冲洗，切成小块移入培养基，于28℃下进行培养； 另一种方法是剖取尚未展开耳片的耳基团内的组织块进行分离。 ②胶质菌类组织分离法 （2）菌核组织分离法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 2、 组织分离法 茯苓、猪苓等的子实体不易采集，而它们的菌核却易获得，利用菌核分离，能得到该菌的纯菌种。 将菌核表面洗净，用75％酒精溶液消毒，切开菌核，取中间一小块组织接种在PDA斜面培养基上，塞上棉塞，在25℃下培养。 在挑取组织块时，应取大一点，因菌核是贮藏器官，其大 部分是由贮藏物质一多糖物质构成，仅有少量菌丝。若挑得过小，只挑到贮藏物质而没有挑到菌丝，分离就不成功。 （3）菌索分离法 食用菌分离技术 （二）菌种的分离 2、 组织分离法 蜜环菌、假蜜环菌等子实体难得，也无菌核，可用菌索来分离获得其菌种。 操