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62. 怎样对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测和筛选? 根据表达载体中标记基因的特点,利用选择性培养基进行筛选 63. 目的基因能否在真核细胞中稳定遗传的关键是什么? 转基因生物的 ____________ 染色体 DNA 上是否插入了目的基因 64. 怎样检测转基因生物的染色体 DNA 上是否插入了目的基因? 采用 DNA 分子杂交技术 65.DNA 分子杂交技术的核心是什么? 制备 DNA 探针 66. 怎样制备探针? 将目的基因片段用放射性同位素做标记 46 67.DNA 分子杂交技术的基本程序是什么? ① 提取出转基因生物的 ______________ ; 基因组 DNA ② 把含目的基因的 DNA 片段,用放射性同位素等作标记,以此做 探针 ; 为 ______ 杂交 ; ③ 将探针和转基因生物的基因组 ______ 杂交带 ,表明 __________ 目的基因 已插入染色体 DNA 中。 ④ 若显示出 _________ 68. 怎样检测目的基因是否转录除了 mRNA ? ① ② ③ ④ DNA-RNA 分子杂交技术 mRNA 提取出转基因生物的 ____________ ; 探针 ; 用放射性同位素等作标记的目的基因,做为 ______ 将 DNA 探针和转基因生物的 _______ mRNA 杂交; 杂交带 ,表明目的基因已经 ______________ 转录出了 mRNA 。 若显示出 _______ 47 69. 怎样检测目的基因是否翻译成了蛋白质? 抗原 - 抗体杂交 70. 翻译出蛋白质,是否意味着转基因生物完全满足生产要求? 还需要做个体生物学水平的鉴定 71. 怎样确定转基因植物是否具有抗性以及抗性的程度? 做抗虫或抗病的接种实验( 抗性接种实验 ) 72. 总结目的基因检测和鉴定的 方法 ? 73. 基因工程育种和常规育种相比,有哪些优势? ① 能定向改造生物的遗传性状; ② 克服了远缘杂交不亲和障碍; ③ 能缩短育种周期。 48 基因文库 原核基因 真核基因 启动子、终止子 组件 目的基因、标记 基因、复制原点 动物细胞 植物细胞 微生物细胞 PCR 获取 方法 人工合成 工具酶 识别序列 限制酶 切割位点 切割产物 T 4 DNA 连接酶 DNA 连接酶 E·coli 质粒 DNA 连接酶 噬菌体 载体 动植物病毒 ① 显微注射法 ② 农杆菌转化法、基因枪法、 花粉管通道法 ③ Ca 2+ 处理法 是否插入 DNA 分子杂交 是否转录 DNA-RNA 分子杂交 是否翻译 抗原抗体杂交 结构 目的基因 构建 表达载体 导入 需要 包括 受体细胞 检测和鉴定 方法 抗性接种 个体 水平 分子 水平 探 针 50 1.3 基因工程的应用 1. 植物基因工程的成果和应用有哪些? ① 抗虫 转基因植物; ② 抗病 转基因植物; ③ 抗逆 转基因植物; ④ 改良 植物品质。 2. 大量使用化学农药的危害有哪些? ①造成严重的环境污染;②危害人体健康;③增加生产成本 3. 常用的抗虫基因有哪些? Bt 毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、 植物凝集素基因等 51 4. 什么是病原微生物?主要有哪些? 引起动植物生病的微生物,主要有病毒、细菌和真菌等 5. 为什么常规育种很难培育出抗病毒的作物新品种? 作物自身缺少抗病毒的基因,杂交不可行;诱变育种不定向。 6. 在抗病转基因植物中使用最多的是什么基因? 病毒外壳蛋白基因;病毒的复制酶基因 7. 在抗真菌转基因植物中可使用的基因有哪些? 几丁质酶基因和抗毒素合成基因 8. 哪些非生物的环境条件会造成农作物低产、减产? 盐碱、干旱、低温和涝害等 52 9. 利用什么基因可以提高作物的抗盐碱、抗干旱能力? 调节细胞渗透压的基因 10. 怎样使作物具有抗寒、抗除草剂的能力? 导入抗冻蛋白基因、导入抗除草剂基因 11. 怎样提高植物细胞中必需氨基酸的含量? ① 将必需氨基酸含量多的蛋白质 ________ 编码基因 导入植物; ② 改变必需氨基酸合成途径中某种 _______ 关键酶 的活性。 12. 怎样使转基因花卉呈现出原先没有的颜色变异? 导入与植物花青素代谢有关的基因(控制酶合成的相关基因) 53 6. 限制酶的识别序列有何特点? 限制酶所识别的序列,可以找到一条中轴线,中轴线 两侧的双链 DNA 上的碱基是反向对称、重复排列的 7. 限制酶切割的部位在哪里? 相邻脱氧核苷酸之间由 _____ 脱氧核糖 所形成的磷酸二酯键 磷酸 和 _________ 8. 限制酶切割 DNA 产生怎样的结果? 中轴线两侧 切割,产生黏性末端; ① 在识别序列 _______________ 中轴线处 ② 在识别序列 _______________ 切割
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