基因克隆操作过程.pptxVIP

基因克隆操作过程第1页/共63页restriction endonucleaseDNA ligase切接转增检2011-10-23基因克隆操作过程第2页/共63页一、DNA的体外重组（切与接）2011-10-23基因克隆操作过程第3页/共63页1.DNA的体外重组（一）——切工具：限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）作用对象：目的基因片段、载体目的：获得具有互补粘性末端（或平末端）的线性目的基因片段和线性化载体2011-10-23基因克隆操作过程EcoR IHind IIIPvu II 第4页/共63页2011-10-23基因克隆操作过程各种限制酶酶切反应所使用的buffer（Takara）第5页/共63页双酶联合酶切所使用的buffer（Takara）2011-10-23基因克隆操作过程第6页/共63页单酶切实例（Takara）2011-10-23基因克隆操作过程第7页/共63页双酶联合酶切实例（Takara）2011-10-23基因克隆操作过程第8页/共63页2. DNA的体外重组（二）——接工具：DNA连接酶（DNA ligase） 作用对象：具有互补粘性末端（或平末端）的线性目的基因片段和线性化载体目的：获得含有目的基因的环状载体2011-10-23基因克隆操作过程5 GGAATTC AATTCGAATTC AATTC5 GAATTCG5 G