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离子液体中酶催化拆分布洛芬的反应研究 目 录 TOC \o 1-3 \u 摘要 1 1 前言 2 1.1脂肪酶简介 2 1.2离子液体概述 3 1.3酯化反应 4 1.4本论文选题目的和意义及主要内容 5 2 实验部分 5 2.1实验材料 5 2.2酶催化拆分反应 5 2.3产物分析 5 2.4对映选择性的计算 6 3 结果与讨论 6 3.1酶的筛选 6 3.2异辛烷和[BMIM][PF6]溶液比例的影响 8 3.3反应时间的影响 9 3.4酶的负载效应 10 4 结论 11 参考文献 12 谢辞 13 PAGE 1 离子液体中酶催化拆分布洛芬的反应研究 摘 要：在分别含有[BMIM][PF6]和[BMIM][BF4]两种离子液体的体系中，将两种天然酶和四种商品酶用于拆分布洛芬的反应。与纯异辛烷相比，在含有离子液体的异辛烷体系中脂肪酶表现出较高的转化率。虽然，柱状假丝酵母菌商品酶的对映体选择性（E=8.5）相比其他酶高，但还有另一种天然脂肪酶，同样具有良好的对映体选择性（E=4.6）。通过反应条件的优化（异辛烷/离子液体的比例，酶量和反应时间），AN脂肪酶(15%w/v)在[BMIM][PF6]：异辛烷=1:1体系中反应96小时后可以获得更高的对映体选择性（E=9.2）。 关键词：脂肪酶；布洛芬；离子液体 Esterification of (R, S)-Ibuprofen by native and commercial lipases in a two-phase system containing ionic liquids Abstract: Four commercially available lipases and two native lipases from Aspergillus niger AC-54 and Aspergillus terreus AC-430 were used for the resolution of (R, S)-Ibuprofen in systems containing the ionic liquids [BMIM][PF6] and [BMIM][BF4]. The lipases showed higher conversion in a two-phase system using [BMIM][PF6] and isooctane compared to that in pure isooctane. Although the best enzyme was a commercially available lipase from Candida rugosa (E =8.5), another native lipase, produced in our laboratory, from A niger gave better enantioselectivity (E= 4.6) than the other lipases tested (E=1.9-3.3). After thorough optimization of several reaction conditions (type and ratios of isooctane/ionic liquid, amount of enzyme, and reaction time), the E-value of A. niger lipase (15% w/v) could be duplicated (E= 9.2) in a solvent system composed of [BMIM][ PF6] and isooctane (1:1) after 96 h of reaction. Keywords: lipases, Ibuprofen，ionic liquid 1.前言 1.1 脂肪酶简介 脂肪酶( Lipase EC3，甘油酯水解酶)是一类水解油酯的酶类。脂肪酶的水解底物一般是天然油脂，其水解部位是油脂中脂肪酸和甘油相连接的酯键。不同于其它水解酶,脂肪酶催化作用系统是一种非均相体系。水溶性的酶催化作用发生在水不溶性底物和水的界面上。这种界面上的催化作用机制仍不甚清楚，不能简单用Michaelis-Menten学说解释酶与底物间的反应机制。有人提出了脂肪酶在油水界面上定位的假设,提出了超底物的模型,该模型能解释脂肪酶的一些行为，但还需要进一步的实验证明和修正。此外，脂肪酶兼具有逆向催化甘油和游离脂肪酸合成甘油脂活性[1]。 由于脂肪酶独特的催化特性，活力测定具有以下特点：（1）方法的多样性；（2）测量过程影响因素的复杂性；（3）酶活力定义的混乱性。本文对脂肪酶活力测定方法