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Hiseq/Miseq测序原理简介 主 要 内 容 Follow Cell Solexa技术简介 可逆阻断技术 测序原理 边合成边测序 工作流程 桥式PCR 测序类型 碱基读取 仪器构造 测序结果展示 一．Solexa测序技术前世今生 —Illumina平台 •Solexa高通量测序技术是由英国剑桥大学派生的Solexa公司建立起来的。 该方法以单分子阵列技术为基础，是对合成测序技术的发展与延伸。 二．测序原理 Solexa是一种基于边合成边测序技术（Sequencing-By-Synthesis， SBS）的新型测序技术。通过单分子阵列实现在小型芯片（Flow Cell ）上进行桥式PCR反应。通过可逆阻断技术实现每次只合成 一个碱基，再利用相应的激光激发荧光集团，捕获激发光，从而 读取碱基信息。 Flow Cell 70mm ×25mm 可逆阻断技术 边合成边测序（SBS） 5’- 3’- A A T G T T C C G G G G A A T T A C C C A T T ➢加入测序引物 C T C G A ➢Cycles1 A T A G G G T A a) 合成第一个碱基 C T G b) 清除未反应的碱基和试剂 c) 激发荧光信号并读取 可逆阻断技术 d) 去除荧光基团和阻断基团 ➢Cycle2……Cycle n 桥式PCR ——簇生成之“起始延伸” 桥式PCR ——簇生成之“扩增” 桥式PCR ——簇生成之“测序” 碱基读取 三．工作流程 四．测序类型 a) 单端测序（single-read sequencing，SR） b) 双端测序（Paired-end sequencing，PE ） c) 混样测序（Index sequencing ） Follow Cell 接头差异 Paired End Single Read Uracil Specific Excision Reagent (USER) 尿嘧啶切割位点 Periodate Linearization Formamidopyrimidine Glycosylase (f