BCA法测定蛋白质浓度讲课文档.pptVIP

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BCA法测定蛋白质浓度;【实验原理】 ;Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度 ;【实验器材与试剂】 ;;;;2.试剂;【实验步骤】;2.以蛋白质含量为横坐标,光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。 3.用测定管平均光吸收值在标准曲线上查出相应的蛋白质含量,计算求出该待测血清蛋白质的含量(g/L)。 4.从标准管中选择一管与测定管光吸收值相接近者,按比色法计算公式计算求出该待测血清的蛋白质浓度(g/L)。;【思考题】 试比较BCA法与双缩脲法、Lowery法的异同。 为什么BCA法常常用于科研?其有哪些优势?;【实验原理】 分子中含有两个或两个以上肽键(-CONH-)的化合物, 在碱性溶液中能与硫酸铜中Cu2+反应生成紫红色化合物, 此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多肽键,具有双缩脲反应, 且在一定范围内紫红色颜色的深浅与蛋白质含量成正比 ,因此可以用光吸收法测定样品中蛋白质的含量。;此方法被科研工作者广泛选用,其特点: 1. 操作简便,快速,比经典的Lowry法快4倍; 2. 灵敏度高,最小检测量达0.5μg; 3. 准确,试剂稳定性好,在20μg/ml~2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法; 4. 经济实用,测定可在微板孔中进行(待测样品体积为1μl-20μl),可大大节约样品和试剂用量; 5. 抗干扰能力较强,不受绝大部分样品中的去污剂、尿素等化学物质影响。 ;;方法

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