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有对于无菌检查方法的考证 有对于无菌检查方法的考证 有对于无菌检查方法的考证 无菌检查方法的考证 无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其余制品能否无菌而成立的试验方法， 是作为无菌产品批放行的重要依照及药监部门对无菌产质量量看管的一个重要项目。所以 怎样保证无菌检查方法的正确靠谱至关重要，而检查方法的考证是保证检查结果的公正、 科学和正确的基础，所以各个主要国家的 GMP或药典都对无菌检查方法的考证提出了严格 的要求， 2010 版中国药典对剖析方法考证和检查的要求也有大幅度的提升，同时也是 GMP 检查中检查的要点和简单发现问题的地区。 考证要求与方法 无菌检查方法考证一般分为前考证和再考证两种。 前考证，也称预考证，指在无菌剖析方法正式使用前，依照预约考证方案进行的考证。 假如没有充足的原由，任何检查方法一定进行前考证。 再考证，指某一检查方法经过考证并在使用一段时间后进行的，旨在证明已考证状态 没有发生飘移而进行的从头考证及对检查方法进行订正、改变时进行的考证。 往常一个无菌产品的检查流程为：第一鉴于产品的剂型、溶解度等性质，依照药典的 要求确立能否需要进行前办理 ; 而后依据产品的特征能否有抑菌性，确立能否需要增添去除 产品抑菌性的方法 ; 最后考证整个检查方法顶用到的全部及试验过程中的每一个环节包含样 品的预办理方式、检查过程、培育条件等均不影响样品中微生物的生长。 这里，考证的要点环节包含： 前办理方法直接影响后续步骤的成效和重现性，应是考证的要点。 供试品中抑菌活性的去除是目前考证工作的要点，特别重申应充足考证供试品自己对 微生物生长的影响。 详细的考证方法以下： 菌种的选择 无菌检查方法考证中往常选择以下 6 种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代 表不一样种类的菌种：枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63 501] 代表药品中常有的污染菌——芽孢杆 菌、金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26 003] 代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941] 代表 厌氧菌、大肠埃希菌 [CMCC(B)44 102] 代表革兰阴性菌、白色念珠菌 [CMCC(F)98 001] 代 表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003] 代表霉菌。 菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培育物至营养肉汤培育基中 或营养琼脂培育基上，接种生孢梭菌的新鲜培育物至硫乙醇酸盐流体培育基中， 30~35 ℃ 培育 18~24h; 接种白色念珠菌的新鲜培育物至改进马丁培育基中或改进马丁琼脂培育基上， 23~28℃培育 24~48h，上述培育物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于 100cfu 的 菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培育物至改进马丁琼脂斜面培育基上， 23~28 ℃培育 5~7 天， 加入 3~5ml 含 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。而后，采 用适合的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯 化钠溶液制成每 1ml 含孢子数小于 100cfu 的孢子悬液。 样品的前办理 无菌产品中每个成分应当是平均的，所以只需确立在考证的方法中，按所需的总接种 量即可，而不用像样品平时检测中按规定的容器数取样。 假如制备样品时需要使用溶解剂、稀释剂、助溶剂、破乳剂等溶剂，需要保证这些溶 剂是有效的，而且其使用对微生物生长无影响 ; 或许制备过程中需要对样品进行加热助溶、 离心等操作时，需要保证加热的温度、离心速度和离心时间等对微生物生长或散布无影响。 不需前办理的样品免做。 除去样品抑菌性的方法 无抑菌性样品的考证方法：依照产品溶解性和微生物限度选择适合的中性稀释剂溶解 和稀释，用直接接种法考证，常用中性稀释液或淋洗液。 对于拥有抑菌性样品的考证方法，第一确立样品的抑菌作用 ( 抑细菌、真菌试验考证 ) ， 选择敏感标准菌株对供试品抑菌活性去除成效检查 ( 阳性菌回收试验 ) 。常用的除去样品抑 菌活性的方法以下： 稀释法：利用降低供试品的相对浓度，将样品稀释至最低抑菌浓度下进行。如：取规 定量的样品溶液至较大批的培育基中，使单位体积内的样品含量减少，至不含抑菌作用。 薄膜过滤法：利用体积差别分别，经过薄膜过滤，微生物被截于滤膜，培育薄膜察看 有无微生物生长。往常薄膜孔径应不大于 0.45 μm，直径一般为 50?mm，若采纳其余直径的 滤膜，冲刷量应进行相应的调整。滤器和滤膜在使用前采纳适合的方法进行灭菌。使用时 应保证滤膜在过滤前后的完好性。水溶性供试液过滤前先将少许的冲刷液过滤以湿润滤膜。 油类供试液其滤膜和滤器在使用前应充足干燥。 供试液经过滤膜过滤后，若需要用冲刷液冲刷滤膜，每张