工业微生物接种技术.pptxVIP

工业微生物接种技术第1页/共83页无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。第2页/共83页一、防污染措施物品：高压湿热灭菌操作者：无菌工作服、鞋、帽、口罩环境操作污染途径第3页/共83页（一）操作者 人的体表、皮肤和粘膜上长期寄居一些微生物，这种正常的微生物有一定的种类和数量，和宿主、体外环境三者之间保持动态平衡，有益于宿主健康，所以这类微生物我们称为正常菌群，他们保持了人体的微生态平衡。第4页/共83页对于我们制药工业来说，在口服药和局部药制备过程中，要求操作人员清洗和消毒双手，穿上专用工作衣帽进行操作，既可减少微生物污染。但在制备无菌要求高的注射剂和眼用、耳用溶液时要求操作人员操作前穿上全套的工作衣帽包括操作衣、裤、靴子、帽、面罩和手套。此外不允许带菌者操作。第5页/共83页 空气中的微生物（细菌芽孢和霉菌孢子）主要来自灰尘，或者人的皮肤、衣服，或者由我们谈话、咳嗽、打喷嚏时飞沫中带的微生物，人越多的地方，相对微生物数量就多一些，灰尘多的房间比干净的房间微生物多。 （二）环境第6页/共83页第7页/共83页无菌环境的要求与保持无菌室超净工作台无菌环境第8页/共83页无菌环境的要求与保持1、无菌室（1）无菌室的结构：密封、避光，设百叶通气窗，侧面底部设进气孔应有缓冲间(外间)、操作间安装拉门第9页/共83页（2）无菌室内的设备缓冲间、操作间安装日光灯和紫外灯，紫外灯距地高度2.0-2.2m;缓冲间内放置工作服、鞋、帽、口罩，消毒用药物；超净工作台，内备接种用常用器具;酒精灯、接种环、打火机或火柴、记号笔、镊子、酒精棉球瓶第10页/共83页（3）无菌室的消毒和防污染无菌室内空气测试应基本达到无菌。使用前后紫外线照射均照射30min每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。第11页/共83页（4）无菌室空气污染情况的检验 使用前或操作后检查，应无杂菌； 若杂菌多为霉菌时，应通风干燥；杂菌多为细菌时，乳酸熏蒸效果较好。第12页/共83页（5）无菌室操作规则操作前打开缓冲间和操作间的紫外灯30min;器材和用品一次性全部放入无菌室，避免在操作过程中进出无菌室或传递物品.进入缓冲间，换好工作服、鞋、帽、口罩，手消毒无菌操作操作后收拾台面，紫外灯照射。第13页/共83页2、超净工作台 超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程度的保护以防污染并保护操作者。 原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分，现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。 第14页/共83页垂直流超净工作台 垂直流超净工作台 水平流超净工作台 第15页/共83页超净台的使用与维护风速保持在0.32-0.48米/秒使用前打开紫外灯照射30-60min开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭；请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物；使用完毕，关闭酒精灯；使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15min.定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。第16页/共83页（三）无菌操作要求（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作；（2）使用玻璃器皿应轻取轻放。（3）在火焰上方操作；（4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；（5）在接种培养物时，协作应轻、准。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。 第17页/共83页二、微生物接种技术接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。接种的基本程序常用接种方法斜面接种划线接种液体接种穿刺接种 灭菌接种环第18页/共83页杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本沾取标本操作需在无菌室或超净工作台内进行无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。实验使用的物品使用前后需严格灭菌接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境（一）接种的基本程序第19页/共83页（二）接种的操作方法斜面接种液体接种穿刺接种平板接种 第20页/共83页1. 斜面接种 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。 用于好气性微生物的接种，可进行好氧微生物的形态观察或菌种保藏第21页/共83页1.消毒： 手和台面用75%酒精棉消毒2.标记： 接种前在距离试管口2-3cm位置注明菌名、接种日期、 接种人姓名3.整理台面： 左手用的物品放左手边，右手用的物品放右手边，酒 精灯位于中央；无菌物