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海洋甲壳类动物免疫学研究 甲壳动物因身体外披有“盔甲”而得名。甲壳动物大多数生活在海洋里，少数栖息在淡 水中和陆地上。虾、蟹等甲壳动物有5 对足，其中4 对用来爬行和游泳，还有一对螯足用来 御敌和捕食。虾和蟹是甲壳类动物中最主要的两种代表物种。虾和蟹的生物学特性在甲壳类 动物的科学研究方面最有代表性。 近年来,由于受病害影响,对虾养殖业蒙受了巨大的损失。传统上治疗和预防虾类疾病 主要依赖抗生素、化学药物等,这些药物的滥用造成环境污染、药物残留、产生耐药性细菌 等严重问题,对安全水产品的生产、出口创汇带来负面影响。因此,人们已开始把注意力转移 到对虾的免疫机制,并越来越重视提高虾类自身的抗病能力。一般认为,甲壳动物的免疫主要 为非特异性免疫,其体液不具有免疫球蛋白。然而许多体液免疫因子在甲壳类动物机体的免 疫防御反应中具十分重要的作用。这些因子包括天然形成和诱导产生的各种生物活性分子, 主要有血淋巴中各种抗菌因子、抗病毒因子、凝集素、溶血素、超氧化物歧化酶、溶菌酶, 以及由血细胞释放的酚氧化酶原激活系统等,他们能识别外来入侵的病原菌和病毒等异物, 通过凝集、沉淀、包囊、溶解等方式抑制病原体的生长和扩散,或者直接将其杀灭并排出体 外。 一、甲壳动物的体液免疫是依靠血淋巴中一些非特异性的酶或因子来进行的。例如： 1. 凝集素 凝集素(Lectins) 是一类对特定细胞多糖具有结合亲和力的、能选择凝集脊椎动物血细胞和 某些微生物细胞的、多价构型的热敏蛋白或糖蛋白复合物。无脊椎动物的凝集素一般为外源 凝集素。凝集素的最大特征在于它们能够识别糖蛋白和糖肽中,特别是细胞膜中复杂的碳水 化合物结构,即细胞膜表面的碳水化合物决定簇———糖基[1 ] 。凝集素的主要功能是使血 淋巴中的异物分子发生凝集。一种凝集素具有对某一种特异性糖基专一性结合的能力,因而 已广泛应用于免疫和分离淋巴细胞、鉴别变异细胞(特别是肿瘤细胞) 、分离含糖分子、鉴 定血型、作分子探针等。凝集素现已成为生物化学、细胞生物学、免疫学及医学领域中进行 研究的有用工具[2 ] 。凝集素广泛存在于生物体中,在高等植物、脊椎动物、无脊椎动物、 微生物及病毒中均有发现。早期对凝集素的研究多集中在高等植物,而对甲壳动物凝集素的 研究较少。迄今为止,人们已在200 多种无脊椎动物中发现凝集素,其中40 多种属于甲壳动 物,如龙虾、蟹、日本对虾、中国对虾、Penaeus indicus等[3～11 ] 。它们在血淋巴中可 以引起异物聚集,在体外可选择凝集脊椎动物血细胞和某些细菌微生物,并充当识别因子,根 据异物表面的糖基组成识别“异己”,具有高度的调理作用,可在吞噬细胞和异物间形成分子 连接,促进吞噬细胞对异物的吞噬作用[4 ] 。中国对虾凝集素主要分布在血淋巴液和血细胞 中[7 ] 。现已从中国对虾血淋巴液中分离出一种凝集素,该凝集素由2 个亚基组成,相对分 子质量分别为80 000 和75 000。此凝集素能凝集牛、马、鼠、兔、鸡、羊和人的A、B、O 型 红细胞。其凝集活性不被D2甘露糖、D2果糖、D2乳糖、乙酰半乳糖、神经氨酸、D2半乳糖、 D2葡萄糖和D2岩藻糖抑制[6 ] ,其最适pH为6～8 ,对Ca2 + 、Mg2 + 、Mn2 + 等离子不敏感, 而金属离子螯合剂EDTA 可以明显抑制其凝集活性,说明在中国对虾血淋巴的凝集活动中,二 价金属离子仍然必不可少[7 ] 。而Penaeus indicus 血清凝集活力不需要Ca2 + 或Mg2 + , 对EDTA 和EGTA 也不敏感[8 ] 。日本对虾血清凝集鹌鹑红细胞的活力依赖于Ca2 + ,而肌肉 提取液对鹌鹑红细胞的凝集活性不依赖于Ca2 + [9 ] 。日本对虾血淋巴中除了对大白鼠、 小白鼠、豚鼠、鸡、兔等动物及人的血细胞具有凝集活性外,还可以同溶藻弧菌、肋生弧菌、 创伤弧菌等多株细菌发生凝集反应[10 ] 。罗日祥等的实验表明,凝集素凝集活力的大小同 中国对虾的健康状态关系密切,发病对虾体内的凝集素活力明显下降,建议作为中国对虾健 康与否的一个血液化学指标[12 ] 。 1 2.酚氧化酶( PO) 及酚氧化酶原( proPO) 激活系统甲壳动物的酚氧化酶原激活系统是 由丝氨酸蛋白酶和其他因子组成的一个复杂的酶级联系统[13] 。它无论从组成、激活方式 还是从免疫功能上都非常类似于高等动物的补体系统。当病原微生物或寄生虫等侵入机体后, 其细胞壁结构成分(如真菌中的葡聚糖和革兰阴性