工业分析 样品采集与设备课件 3.5 色谱分离法 3.5.3 薄层色谱法.pptxVIP

薄层色谱法课程：分析制样技术薄层色谱法一、薄层色谱法概念及原理薄层色谱法（常用TLC表示）又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。样品在薄层板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分离。由于吸附剂对不同组分的吸附能力的不同，使它们在薄层上的移动速度也有差别，从而得以分离，显然试样中吸附能力最弱的组分在薄层中移动距离最大，而试样中吸附能力最强的组分在薄层中移动距离最小。二、吸附剂与展开剂的选择（1）吸附剂： 选择吸附剂时，要求有一定的比表面积，稳定性和机械强度好，不溶于展开剂，不与展开剂和样品组分反应。（硅胶、氧化铝最为常见）硅胶或氧化铝对各类有机化合物的吸附能力大小顺序如下：羧酸醇、酰胺伯胺酯、醛、酮腈、叔胺、硝基化合物醚烯烃卤代烃烷烃二、吸附剂与展开剂的选择（2）展开剂：选择展开剂时，主要考虑极性，其洗脱能力与极性成正比。分离极性大的化合物赢选用极性展开剂，而分离极性小或非极性的化合物应选用极性小的展开剂。单一溶剂极性大小顺序如下：酸吡啶甲醇乙醇正丙醇丙酮乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲苯苯四氯化碳二硫化碳环己烷石油醚三、薄层色谱法操作过程 （1）制板 ①倾注法： 将适量过滤倒入烧杯中，加少量水搅拌成均匀糊状，迅速倒在玻璃板上，用玻棒小心铺平，轻轻振动，尽量使吸附剂均匀。然后风干，置于烘箱中，在105～110℃下活化45min左右，取出放于干燥器中备用。 ② 刮平法：将一长条玻璃的两边放置两块合适的玻璃为边，再将调好的糊状硅胶迅速倒在玻璃板上，用有机玻璃尺沿一个方向将硅胶刮为均匀薄层。去掉两边玻璃，晾干、活化，取出放于干燥器中备用。 ③ 涂布器法：用转移的涂布器（市售或自制）来制作薄层，快速方便，制成的薄板质量好。三、薄层色谱法操作过程（2）点样 用一根玻璃毛细管或点样器，吸取样品溶液，在距薄层一端约2cm的起始线上点样，每点间距约2cm，样品点直径一般小于0.5cm。注意点样量要适中，太少时，某些成分不能被检出；太多时容易产生拖尾现象，即每个斑点都拉得很长，互相重叠，不能分开。 (3）展开 将点好样的薄层板置于已为展开剂蒸气饱和的层析缸中，点有样品的一端浸入展开剂中，盖好盖子，使层析缸密闭，直至展开完毕。 对于样品中的有色组分，在薄层上会出现对应的有色斑点，而无色组分需用合适方法使其斑点显色，显色之前应使展开剂完全挥发。 三、薄层色谱法操作过程(4)检测显色也称定位，即用某种方法使经色谱展开后的混合物斑点呈现颜色，以便观察其位置，显色方法主要有以下几种: ① 蒸气显色法：利用样品组分与单质碘、液溴、浓氨水等物质的蒸气作用而显色。将上述易挥发物质放于密闭容器中，再将展开剂已完全挥发的薄层板放入则显色。② 显色剂显色法：将一定浓度的显色剂溶液均匀喷洒在薄层上，是样品组分显色。 ③ 紫外显色法：某些化合物在紫外光照射下回发出荧光，可将展开剂挥发后的薄层在紫外灯下观察荧光斑点，并用铅笔在薄层上做记号。一些不发荧光的物质用荧光衍生化试剂作用后也可用同样的方法观察。 四、注意事项1）展开时，层析缸中的有机溶剂蒸气必须达到饱和，否则，Rf值将不能重现。2）在薄层用的吸附剂中，硅胶适用于酸性和中性组分的分离，碱性组分与硅胶有相互作用，不易展开，或发生拖尾现象，不好分离；氧化铝适用于碱性好中性组分的分离，但不适用于酸性组分的分离。3）如果单一展开剂效果不好，可以用混合溶剂，通过改变溶剂组分和比例来调整展开剂的极性，从而达到分离效果的目的。4）点样时要注意待前一滴溶剂挥发后再点后一滴，这样能够使点成的斑点尽量小，不会严重扩散。5）样品浓度要合适，太高容易引起斑点拖尾，太低则斑点扩散，一般控制浓度为0.1%～1%。痕量组分的检测同系物与异构体分离无机离子的分离五、薄层色谱法-应用 总结薄层色谱法概念及原理吸附剂与展开剂的选择薄层色谱法操作过程注意事项薄层色谱法应用