实验一细胞培养常用仪器与器皿的认识和使用.docxVIP

实验一 细胞培养常用仪器与器皿的认识和使用 【实验目的】 1. 了解细胞培养部分仪器的使用； 2. 掌握细胞培养常用仪器与器皿的使用。 【实验内容】 一、培养设备 1. 无菌室：为相对密封、防尘、防菌的空间。一般由更衣间、缓冲间和操作间组成（P29）。使用前紫外照射1-2h，每周甲醛、乳酸或过氧乙酸熏蒸2h和每月新洁尔灭檫拭地面和墙壁一次。 2. 超净工作台：为无菌操作装置，有测流、外流和直流式三种。使用前紫外照射10-30min，使用后70%酒精檫拭台面，定期福尔马林熏蒸。 3. CO2培养箱：用于培养细胞。按要求恒定供给CO2（5%）、保持稳定的温度（37℃）、pH值（7.2-7.4）和饱和湿度（95%）。 二、细胞观察与计数设备 1. 倒置显微镜：定期检查细胞生长情况。 2. 细胞计数板和电子细胞计数仪：用于计算细胞数目。 三、细胞保存设备 液氮生物容器：俗称液氮罐，标准大气压下其内温度可低至—190℃，适用于细胞、组织的长期冻存。罐口不密封，要定期加注液氮，加液氮和取材料时要注意保护好眼睛和手脚。 四、消毒灭菌相关设备 1. 压力蒸汽消毒器：可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭菌的物品放在高压锅内（物件不宜过多），加热时蒸汽不外溢，高压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在103.4kPa蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15～20分钟可达灭菌目的。适用于普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。使用时要注意锅内的水位，取物时要检查压力是否为零。 2. 无菌过滤器：为除菌设备，分反复适用型和一次性过滤器，使用时一般用微孔直径0.22μm的滤膜。 3. 酸缸：用于去除玻璃器皿壁上的污物。缸内的清洁液（具强腐蚀性，加取物件时需戴胶手套穿长袖工作衣）的配置：称取一定量的重铬酸钾，于干燥研钵中研细，将此细粉加入盛有适量水的玻璃容器内，加热，搅拌使溶解，待冷后，将此玻璃容器放在冷水浴中，缓慢将浓硫酸断续加入，不断搅拌，勿使温度过高，容器内容物颜色渐变深，并注意冷却，直至加完混匀。 4. 电热恒温干燥箱：用于烘干和干热消毒玻璃器皿。注意烘烤物件时一般温度不能超过60℃，烘干后要及时转移物件。 五、移液设备 1. 微量移液器（俗称“枪”）及枪尖：微量移液器分多通道和单通道，单通道常用的规格有0.5-10μl、5-100μl、20-300μl、50-1000μl 和100-5000μl。枪尖有蓝色（1ml）、黄色（200μl）和白色（20μl）三种。 2. 玻璃移液器与洗耳球、细胞吹打管与胶塞。 六、细胞实验相关其他设备 1. 流式细胞仪：在功能水平上对单细胞进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 2. 多功能酶标仪：用于检测溶液的吸光度值。其本质就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计，基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。分为单通道和多通道2种类型。 3. 离心机及离心管：用于分离、传代和处理细胞，转速通常在500-5000rpm，离心体积为0.5-50ml不等。 4. 纯水蒸馏器：分蒸馏式和过滤式。 5. 超声波清洗机：对精密工件上的空穴、狭缝、凹槽、微孔、暗洞等处，通常的洗刷方法难以见效，使用超声清洗却可以达到良好的效果。对质地较硬、声反射强的材料清洗效果较好(如金属、玻璃、陶瓷、塑料)。 七、常用培养器皿 1. 玻璃瓶：分配翻盖胶塞的盐水瓶和配塑料螺旋盖的盛液瓶。规格有500ml、250ml、100ml和50ml。 2. 培养瓶：主要用于培养细胞。常用的规格有15ml、25ml、75ml、100ml、200ml、275ml、500ml和1000ml等。 3. 培养皿：按直径分30ml、60 ml、100 ml、150 ml和300 ml。 4. 培养板：根据孔数分6孔（底面积为9.6cm2、加培养液为2.5ml）、12孔（底面积为4.5cm2、 加培养液为2.0ml）、24孔（底面积为2cm2、加培养液为1.0ml）和96孔（底面积为0.32cm2、加培 养液为0.1ml）。