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蓝耳病毒（ PRRSV）ELISA 检测试剂盒操作说明
一、介绍：
VDPro? PRRSV-VR 或 LV 抗体检测试剂盒是用 ELISA 来定量检测猪蓝耳病毒 （美洲株或欧洲
株）抗体。试剂盒是用重组 PRRSV（美洲株或欧洲株）的 N 蛋白包被，用来检测血清中 N
蛋白抗体。
通过监测猪群中 PRRSV抗体滴度，这种血清学定量检测方法能够提供有效地信息，用
来预防和控制该疾病。
二、试验原理：
VDPro? PRRSV-VR,PRRSV-LV 抗体检测试剂盒是通过间接 ELISA 检测血清中 PRRSV抗体，
用重组 N 蛋白包被，酶标抗体为猪抗 IgG 。实验操作步骤是样品稀释，加样，孵育，洗涤；
再加入酶标抗体，如果血清中含有 N 蛋白抗体，则抗体会与酶标板上包被的重组 N 蛋白结
合，酶标抗体也会与血清中 N蛋白抗体结合，加入底物后，颜色将会变深。如果血清中没
有 N 蛋白抗体，颜色变化会很小，或不发生变化。
三、试剂盒内容：
1 、 PRRSV重组 N 蛋白包被板 5 块
2 、 10 倍洗液 200 毫升
3 、血清稀释液 200 毫升
4 、酶结合抗体 50 毫升
5 、阳性血清对照 2 毫升
6 、阴性血清对照 2 毫升
7 、显色底物 60 毫升
8 、终止液 30 毫升
四、采样标准
①尽可能采集新鲜血清样品。
②采集全血，分离出血清后，将血清存放在 -20 度冰箱，以备使用。
③不要使用溶血或污染严重的样品
④大中型猪场监测时，每群（后备母猪、经产母猪、断奶仔猪等）采样不少于 35 头份；
五、注意事项：
1、使用之前请仔细阅读使用说和操作明；
2 、试剂盒储存条件： 4-8 ℃；
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六、实验前准备：
1、洗液 10 倍稀释：即 20ml 洗液，加入 180ml 去离子水混匀，备用。
2 、TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。
七、样品稀释：
1、准备好 1ml 样品稀释板或微量试管；
2 、样品按 100 倍稀释，分步稀释：即先加入 90 微升样品稀释液，再加入 10 微升的样品血
清，混合均匀；再取 90 微升样品稀释液，加入 10 微升经过第一步稀释的血清，混合均匀即
可。 （阳性对照和阴性对照不要稀释）
★稀释后的样品可以同时用来检测 PRRSV(美洲株 ) 、 PRRSV( 欧洲株 ) 和 PCV-2。
八、操作步骤
1、实验前的准备及加样
①使用前所有试剂盒组都必须恢复到室温（ 18 ℃-25 ℃），试剂应轻轻旋转或振荡均匀。
②将 10 洗液进行 10 倍稀释，如 20 毫升洗液加 180 毫升去离子水，即配制 200 毫升。
③取出抗原反应板，在记录表上记录阴阳对照，样品的位置。
④分别在每孔加人 100 μl 稀释后的样品、 阳性和阴性对照 ，贴上封板膜， 室温 （22-27 ℃）
孵育 30min 。
2 、洗板及加试剂
①小心揭掉封板膜，弃去各孔中液体，拍净。每孔加满洗液
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