基因工程的原理和技术.pptVIP

①目的基因的获取； ②表达载体的构建； ③将目的基因导入受体细胞； ④目的基因的检测与鉴定。 单独的目的基因（DNA片段）是不能稳定遗传的。 为了使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传 给下一代，同时使目的基因能正常表达和发挥作用， 必须构建表达载体。 温故知新 为什么要有这一步 基因工程操作步骤的必要性 第二步：基因表达载体的构建 —— 基因工程的核心 构建目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以以传给下一代。 基因表达载体的组成： 目的基因、启动子、终止子、标记基因等 基因表达载体 启动子：位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需蛋白质。 终止子：位于基因的尾端，使转录在所需要的地方停止下来。 标记基因：为了鉴别受体细胞中是否含目的基因，从而筛选出来。 如：抗生素抗性基因 目的基因 标记基因 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同种 一个切口 两个黏性末端 为什么不能将目的基因直接导入受体细胞？ 通过cDNA文库获得的目的基因有启动子和终止子吗？ 在构建表达载体（重组DNA分子）过程中需要什么分子工具？ 只考虑两两结合，可产生几种重组DNA分子？ 三种 不能稳定存在并表达。 cDNA文库的目的基因中没有启动子和终止子.