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血球计数板细胞计数法 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板 （血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬 液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。 不论计数的对象如何， 均须制备分散的细胞悬液。 一、步骤 1、制备细胞悬液：对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤 2 （计数 与计算过程） 。如果计数对象为贴壁生长的细胞， 首先需将培养物按如下步骤制 备成细胞悬液。 1）、终止培养，将培养液吸出，用 PBS 洗培养物一次。 2 ）、给培养瓶内加入 1ml 0.25 ％胰蛋白酶溶液，于 37 ℃消化 3～5min 。 期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。 3 ）、加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加 PBS ），用 吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。 2 、计数与计算过程 1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 2 ）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处 流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。 3 ）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在 上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。 4 ）、按下式计数细胞悬液的密度： 细胞密度＝ （4 个大格细胞总数 /4 ）×104 个/ml 。 二、注意事项： 1）、务必使分散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。 2 ）、显微镜下计数时，遇到 2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计 算。如果细胞团 10 ％，说明细胞分散不充分。 三、显微镜下血球计数板如下图：