蛋白质定量：(BCA法).docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 实验原理 BCA(bicinchoninic acid)是一种稳定的水溶性复合物，在碱性条件下，二价铜离子可以被蛋白质还原成一价铜离子，一价铜离子可以和BCA相互作用，两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的络合物，该复合物为水溶性，在562nm处显示强吸光性，在一定浓度范围内，吸光度与蛋白质含量呈良好的线性关系，制作标准曲线，因此可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。 实验准备 1. BCA定量试剂盒：含A液和B液 A液：BCA碱性溶液（配方：1%BCA二钠盐，0.4%氢氧化钠，0.16%酒石酸钠， 2%无水碳酸钠，0.95%碳酸氢钠，这些液体混合后再调PH至11.25） B液：4%硫酸铜 2.牛蛋白血清（BSA） 3.待测的蛋白样品 实验步骤 1.配置BCA工作液：将A液和B液摇晃混匀，按照A:B=50:1的比例配置BCA工作液，充分混匀。（BCA工作液室温下24h内稳定，故现用现配） 2.配置不同浓度的标准蛋白液（BSA），1ug/ul，2.5 ug/ul，5 ug/ul，7.5 ug/ul，10 ug/ul，待测蛋白样品在什么溶液中，就用该溶液来稀释标准蛋白液（如待测样品溶于强RIPA裂解液，则用强RIPA裂解液来稀释标准蛋白