细胞周期检测-protocol.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 碘化丙啶（propidium iodide, PI）检测凋亡细胞 早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料（如PI）不能时入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。 主要操作步骤如下：①组织块用0.25%胰酶消化30min~1h。②200~400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。③75％乙醇（-20℃预冷）固定细胞1h。④加入PI（终浓度50g／mL）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度50g／mL）1mL染色30min~1h。⑤流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 细胞凋亡情况观察及凋亡率检测 培养48h后细胞分为两部分，一部分行碘化丙啶( pI )染色，倒置相差显微镜下观察细胞核形态变化。另一部分以胰酶消化后收集， 以1800r／min离心5min，弃培养基，用4℃预冷的PBS洗细胞2次，离心去PBS，加入 4℃预冷的70％的乙醇 4℃固定1h，离心弃去固定液， 用