蛋白质分离纯化及检测技术.ppt

蛋白质分离纯化及检测技术;;;自动分布收集器;凝胶过滤层析示意图;凝胶过滤层析示意图;凝胶的结构与性能;;阳离子交换基;阴离子交换基;原理;亲和层析过程：;分配层析;聚丙烯酰胺凝胶电泳;聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺（Acr）和交联剂亚甲双丙烯酰胺(Bis) 在加速剂N，N，N?，N?—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(C17H20O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。凝胶聚合时所形成的微孔影响了不同分子的迁移率，当施加一定电压时小分子的物质的迁移速率将快于大分子的物质，即所谓的分子筛效应。;聚丙烯酰胺凝胶电泳原理;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理;;;试剂 ; 表3.4 分子量范围与凝胶浓度的关系 分子量范围 适用的凝胶浓度/(%) 蛋 白 质 ?104 20-30 1-4×104 15-20 1-5×104-1×105 10-15 1×105 5-10 ?5×105 2-5 核酸(RNA) ?104 15-20 104-105 5-10 105-2×106 2-2.6 ;原理;;图像分析;图像分析;离心技术;离心技术的原理;沉降系数;相对离心力;离心机的分类;蔗糖密度梯度离心;CSCl密度梯度离心;超速离心;1. 凯氏定氮法;2. 双缩脲法;3. Folin-酚法;特点：;4. 蛋白质的紫外吸收;5. 考马斯亮蓝法;缺点;抗体的制备;佐剂;效价;抗体制备过程;血清的采集;双向琼脂板扩散免疫试验;双向琼脂板扩散免疫试验;琼脂板双向扩散免疫实验;a、b、c板中心孔为纯化的抗原SCMRP，稀释倍数分别是0、1/4、1/16；四周孔为制备的抗血清梯度稀释液和对照，孔1为生理盐水，孔2-7为抗血清0、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32稀释液，孔8为空白；d板为免疫的1号新西兰大耳兔。 ;Western Blot ;;Western Blot 印迹常用转移膜及其特点 ;电转移流程;电转移流程?;转膜条件?;标记;显影