白细胞分离技术汇总.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 外周血白细胞的分离：（细胞分离液有市售，有各种型号：白细胞、单核细胞淋巴细胞等分离液）1 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液液面上，1500r/min离心20 min。（或先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上）2 吸取中间云雾状白细胞，加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min。3 弃上清，加1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至1.5mLEp管中。4 3000r/min离心20 min，弃上清。即得白细胞 可以试试红细胞裂解液提供我的配方：氯化铵82.9克；重碳酸钾10.0克；EDTA0.37克；用三蒸水配成1升 所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则2.分层后的确有3层，准确说来是4层，最下面是红细胞，上面的一层不应该是稍微混浊的白色，应该也比较透明，这一层上面就是我们需要的薄细胞层，最上面是血清3.细节：a.淋巴细胞分离液要避光保存b.就您的试验看来，淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液，然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上，一定要缓慢小心操作，切不可混