细胞培养流程.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 细胞体外培养实验流程 细胞复苏 准备：紫外照台30min，准备好高压灭菌好的吸管、移液管、离心管、废液缸、培养瓶、培养基（含FBS），水浴箱开启到37℃，75%乙醇清洗双手，培养基用前37℃ 灼烧离心管管口、塞子和滴管，用滴管取5mL培养基加入离心管中。 戴好防护用具，从液氮中取出冻存管后立即放入37℃ 用吸细胞液的从冻存管中将细胞悬液完全吸出加入到已装有培养基的离心管中，塞子塞离心管，2000rpm，离心4min，弃上清。 往离心管中加培养基（含FBS）5mL，用吸细胞悬液的滴管轻轻吹打，使细胞混匀，将离心管中的细胞悬液全部吸出加入到培养瓶中，培养瓶平放，轻轻晃动，使细胞均匀贴壁，标记好细胞名称、日期、培养人，放入37℃，5%的CO2恒温 收拾所用物品，75%酒精喷洒消毒。 注意： 离心时转速太高，离心时间过久都易对细胞造成伤害。 滴管一定要严格分开，不能混用，防止细胞污染。 DMSO常温下对细胞毒性较大，故冻存细胞复苏后应立即洗涤冷冻保护剂。 细胞换液 将培养瓶从CO2培养箱中取出，倒置显微镜下观察细胞生长状态（判断生长情况，并确证未发生污染）后转入无菌操作台内。 准备：紫外照台30min，准备好高压灭菌好的吸管、移液管、离心管、废液缸、培养瓶、培