葡萄糖氧化酶酶活测定.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 葡萄糖氧化酶酶活测定 1?酶活单位与定义? pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把?1.0μmol?的?β-D-葡萄糖氧化成?D-葡萄糖酸和?H2O2? 2?测定原理? 葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。 3?试剂和溶液 ? 3.1?磷酸盐缓冲液（pH6.0） 称?取??16.61g??磷?酸?二?氢?钠?（?NaH2PO4·2H2O?）?和??35.82g??磷?酸?氢?二?钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无?CO2?的水中，稀释到?1000ml。 3.2?邻联茴香胺甲醇缓冲液 1g?邻联茴香胺加在?100ml?甲醇中搅拌溶解备用。临用时现配，取?0.1ml?加入到上述缓冲液?12ml?中混匀。 3.3 180g/l?葡萄糖水溶液 18g?葡萄糖加适量水溶解，并定容至?100ml。 3.4?0.03%辣根过氧化物酶液? 称取辣根过氧化物酶（HRP,美国?Ameresco?公司）10mg，溶于?30ml?蒸馏水。? 4? 仪器设备 721-分光光度计、恒温水浴、秒表 ?5? 分析步骤 5.1?待测酶样品的处理?将待测酶样做适当稀释后