实验一 蛋白质的两性电离和等电点的测定.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 实验一 蛋白质的两性电离和等电点的测定 【目的】 验证蛋白质的两性电离与等电点性质。 【原理】 蛋白质由氨基酸组成。蛋白质分子除两端游离的氨基和羧基可解离外，其侧链上的某些酸性基团或碱性基团，在一定的溶液pH条件下，都可解离成带负电荷或带正电荷的基团。因此，蛋白质具有两性解离性质。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势相等，既净电荷为零，成为兼性离子，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点（isoelectric point,pI）。蛋白质在等电点状态时溶解度最低，容易沉淀析出。蛋白质在大于其等电点的pH值溶液中带负电荷；在小于其等电点的pH值溶液中则带正电荷。蛋白质在等点电以外的pH值溶液中，因分子带有同种电荷而相互排斥，不易沉淀。本实验通过观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度来测定其等电点。 蛋白质解离成阳离子 蛋白质成兼性离子 蛋白质解离成阴离子 【操作】 1. 蛋白质的两性电离 取试管1支，按以下步骤加入各种试剂，观察现象变化并记录。 步骤 现象 (1) 5g/L酪蛋白醋酸钠溶液1ml，加入0.1g/L溴甲酚绿指示剂6～7滴，混匀后，观察并记录溶液的颜色。 (2)用细滴管缓慢滴加0.2mol/L HCl溶液，边滴边摇，直至产生明显的大量沉淀，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。 (3)继续滴入0.2mol/L HCl溶液，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。 (4)再滴入0.2mol/L NaOH溶液进行中和，边滴边摇，使之再度产生明显的大量沉淀，继续滴加0.2mol/L NaOH溶液，沉淀又溶解，观察并记录溶液颜色变化。 2. 酪蛋白等电点的测定 取试管5支，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂并混匀。静置室温20分钟后观察各管沉淀出现情况，并以－，＋，＋＋，＋＋＋，＋＋＋＋ 符号记录沉淀的多少。 试管号 加入物（ml） 1 2 3 4 5 蒸馏水 2.4 － 3.0 1.5 3.38 1.00mol/L醋酸溶液 1.6 － － － － 0.10 mol/L醋酸溶液 － 4.0 1.0 － － 0.01 mol/L醋酸溶液 － － － 2.5 0.62 5g/L酪蛋白醋酸钠溶液 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 溶液的最终pH 3.5 4.1 4.7 5.3 5.9 静置室温20分钟 现象 【结果及分析】 【思考题】 1．为什么说蛋白质是两性电离电解质，何谓蛋白质的等电点？ 2. 在等电点状态下，为什么蛋白质容易发生沉淀？ 3. 本实验中酪蛋白处于等电点时则从溶液中沉淀析出，由此得出蛋白质在等电点时必然沉淀，此结论对吗，为什么？ 亲爱的用户 亲爱的用户： 烟雨江南，画屏如展。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，感谢你的阅读。 1、最困难的事就是认识自己。 TIME \@ yy.M.d 20.6.28 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 DATE \@ MMM-yy Jun-20 DATE \@ HH:mm 20:11 2、自知之明是最难得的知识。 TIME \@ EEEE年O月A日 二〇二〇年六月二十八日 TIME \@ yyyy年M月d日星期W 2020年6月28日星期日 3、越是无能的人，越喜欢挑剔别人。 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 4、与肝胆人共事，无字句处读书。 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 5、三军可夺帅也。 DATE \@ dddd, MMMM d, yyyy Sunday, June 28, 2020 DATE \@ MMMM yy June 20 DATE \@ dddd, MMMM d, yyyy Su