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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤 1、拿出电泳仪器和四个烧杯； 2、将超纯水倒入烧杯中，保鲜膜封口； 3、配制过硫酸铵溶液（ AP）： +0.9g 超纯水，保鲜膜封口； 4、拿出全部药品。 Tris-HCL(88, ，TEMED，SDS， Acry-bis ，按序次排好； 5、拿卷纸平铺，移液枪枪头：三个蓝，两个黄，一个白，移液枪 3 只； 6、先配分别胶 7、组装凝胶模具，插好板 （1）海绵用自来水湿润，插在下边槽里； （2）板： Bio-Rad 前后玻璃板，注意前后次序，夹子夹好，塞枪头于夹子上。 8、配胶见配方， 用 2 号蓝混匀全部试剂； 9、加液至支架上方， 用超纯水液封（不可以用气泡） ； 10、待界面清楚后，用滤纸将水吸干； 11、配浓缩胶； 12、插梳子：一个个斜着插，有字面朝向我； 13、拔下梳子，转移（有字朝里， 白色架子垫黄纸， 将玻璃板卡在绿卡下边， 不要有缝隙，装去离子水，不可以漏（ 1h），等候。），样品煮沸 3 分钟； 14、用 10uL 移液枪移液，移液，每个挨次加入梳槽内； 15、电压（浓缩胶） 90V，电流 20mV； 16、盖上盖子：红对红，黑对黑；插上电源插头：红对红，黑对黑。 【附配方】 分别胶 separating gel (5mL) ( 1 个板 1 板 2 板 Prescription 12% 10% % mL mL Del H O mL mL 3mL 2 1.5M Tris-HCL mL mL mL mL mL 30%Acry/bis 2 mL mL mL mL 单体胶（ 29.2g+0.8g/100mL ） 10%SDS 50uL 50uL 50uL 35uL 70uL 10%AP 50uL 50uL 50uL 35uL 70uL TEMED 2uL 2uL(5 uL) 2uL 7uL( 夏)~8 uL 浓缩胶 Stacking gel ( 2 板 3mL) Prescription Volume(2 mL) (2 mL) Del H 2O 0.5M Tris-HCL 250uL 375uL 30%单体胶 330uL 495uL 10%SDS 20uL 30uL 10%AP 20uL 30uL TEMED 2uL(5 uL) 3uL(8 uL 冬， 5 uL 夏 ) 【附所需试剂配制】 1、 30%单体胶（ 30%单体胶即 30%T，%C） 配制 50mL：丙烯酰胺 Acry ： 14.6g ，甲叉双丙 烯酰胺 bis ：0.4g ； (100mL ：Acry 29.2g ，bis 0.8g) 超纯水定容至 50mL， uM 膜过滤， 4℃保留（一个月） ；说明： 单体浓度 %T 是指单体总质量（丙烯酰胺 +双丙烯酰胺）在溶液中的百分比（ m/V），可选择的范围为 3%~30%；%C是指双丙烯酰胺与单体总质量的比值 （m/m），也指交联度。 2、分别胶缓冲液配制 100mL(1.5M Tris-HCL ： Tris 18.15g ，部分去离子水溶解，并用 HCL调，最后定容至 100 mL，过 uM 膜， 4 ℃保留。 3、 浓缩胶缓冲液配制 50mL(0.5M Tris-HCL ：Tris 3.0g ，部分去离子水溶解，并用 HCL 调，最后定容至 50 mL， 4 ℃保留。 4、 10%SDS： 5g/50 mL ，配制后 4 ℃保留。 H 2O 5、 10%AP（过硫酸铵）：用时现配，溶解状态十分不稳固， 0.1g/1mL H 2O。 . 6、电泳缓冲液：配 1000 mL Tris 3.0g ，甘氨酸 14.4g ，SDS1.0g，去离子水定容至 1000 mL。 7、染色液： （1）原液：配制 200 mL：考马斯亮蓝（ R-250）：2.0g+200 mL 去离子水； （2）染色液：配制 500 mL：原液 ，甲醇 250mL，冰乙酸 50mL，去离子水。 8、 脱色液： 1000 mL 甲醇 500 mL，冰乙酸 100 mL，去离子水定容至 1000 mL。 9、 TEMED原液 稳压： Stacking ： 90V（20mA），Seperate ： 120V（ 25mA）。