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肿瘤个人精准医疗 肿瘤个人精准医疗 肿瘤个人精准医疗 肿瘤细胞的培养 一、肿瘤细胞培养技术 二、肿瘤细胞的培养 三、体外培养肿瘤细胞的生物学检测 四、肿瘤细胞的冻存、复苏与运输 五、总结 一、肿瘤细胞培养技术 1、取材 肿瘤细胞培养材料主要来源于外科手术或活检的瘤组织。取材部位非常重要体积较大的肿瘤组织中央常有退变或坏死区，取材时应去掉坏死组织，故应去瘤体的周围瘤组织做培养，癌性转移的淋巴结或癌性胸腹水是较好的培养材料。取材后应尽快进行培养，如因故不能立即培养，可按正常组织储存方法保存，将组织剪成1mm3左右的小块，放入培养液中，置4℃保存，但存放时间不宜超过24h。取材时应注意无菌操作。 类固醇细胞瘤 一、肿瘤细胞培养技术 2、分离 培养液中1mm3的组织块，仅有少量处于周围的细胞可能生存和生长。若要获得大量生长良好的细胞，须将组织分散开，使细胞解离出来。目前分散组织的方法有机械和化学两种，要根据组织种类所需和培养要求，采用适宜的手段。 机械法：机械分散发、剪切分离法 消化分离法：胰蛋白酶消化法、胶原酶法 一、肿瘤细胞培养技术 2、分离 剪切分离法:在进行组织块移植培养时，可以采用剪切发，即将组织剪或 切成小块然后分离培养。 步骤：1、首先将经修整和冲洗过的组织块放入小烧杯中，用剪刀反复剪 切组织至似糊状。 2、用吸管吸取缓冲液或无血清培养液加入烧杯中，反复轻轻吹打， 低速离心去上清剩下的组织小块即可用于培养。 一、肿瘤细胞培养技术 2、分离 胰蛋白酶消化法：适用于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上皮、肝等 组织。对传代细胞效果也很好，胰蛋白酶消化效果主要与 PH值、温度、浓度、组织块大小和硬度有关。 1、将组织块剪切成1~2mm3 2、加入胰蛋白酶37℃热消化 3、过筛200目 4、必要时重复 5、加入胰蛋白酶冷消化6-24h 6、沉淀去上清 7、加新的胰蛋白酶37℃消化30min 8、过筛 9、离心去上清 10、加入血清培养基吹打 11、计数 12、接种瓶培养 热消化 冷消化 共同步骤 一、肿瘤细胞培养技术 2、分离 二、肿瘤细胞的培养 1、原代培养 我们为何要进行原代培养？ 1、建立各种细胞系的第一步 2、是获取细胞的主要手段 3、组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生大变化 4、最接近和反映体内生长特性，适合做药物测试、细胞分化等试验 原代培养方法有组织块法、消化培养法、器官培养法等。最基本和最常用的是组织块法和消化培养法。 二、肿瘤细胞的培养 1、原代培养 组织块培养法是一种简便易行且成功率较高的常用原代培养方法。即将组织剪切成小块后，接种于培养瓶。培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理。例如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长，涂以多聚赖氨酸培养需旺细胞等，适用于组织量少的原代培养。 1、取材修剪冲洗 2、剪成1mm3小块 3、移入培养瓶 4、分布组织小块间距5cm 5、翻转培养瓶并加入适量培养液， 37℃静置2-4h 6、翻正培养瓶进行培养 7、原代细胞生长 二、肿瘤细胞的培养 1、原代培养 这种方法采用前述的组织消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质包括基质、纤维等去除，使细胞分散，形成悬液，易于从外界吸收养分和排出代谢产物，可以很快得到大量活细胞，细胞也可能在短时间内生长成片。适用于培养大量组织，原代细胞产量高；但步骤繁琐、易污染，一些消化酶价格昂贵，实验成本高。 步骤：1、按消化分离法收获细胞。 2、待组织已分散成细胞团或单个细胞，则终止消化，过筛200目 过掉组织块，大块组织继续消化。 3、收集过滤消化液离心1000rpm/min，5min，去上清加含血清 培养液，轻轻吹打形成细胞悬液，计数后接种到培养瓶，置 CO2培养箱培养。 二、肿瘤细胞的培养 1、原代培养 器官培养是指从供体取得器官或器官组织块后，不进行组织分离，保持其原有器官的结构和连接，直接将器官或器官的一部分在体外培养，在培养过程中保持器官或其一部分组织的结构和功能。器官培养主要强调器官组织的相对完整性，重点观察细胞正常联系和排列情况下，它们之间的相互影响，和局部环境的失物调节作用等。 二、肿瘤细胞的培养 2、传代培养 肿瘤细胞的传代是人们利用培养肿瘤细胞作为进一步研究的靶材料。细胞性状的好坏直接影响研