蛋白质一级结构与功能的关系以个氨基酸残基组成的牛胰核糖核酸酶.pptxVIP

蛋白质一级结构与功能的关系以个氨基酸残基组成的牛胰核糖核酸酶会计学 亚基(subunit)蛋白质分子由两条或两条以上肽链组成，每条肽链各自形成了独立的三级结构，分子中的每一个具有独立三级结构肽链,称为亚基2.维持蛋白质四级结构的作用力次级键主要是疏水作用盐键、氢键 第三节 蛋白质结构与功能的关系一、蛋白质一级结构与功能的关系（一） 一级结构是空间构象的基础 以124个氨基酸残基组成的牛胰核糖核酸酶（4对二硫键）为例说明牛胰核糖核酸酶的变性与复性尿素或盐酸胍β-巯基乙醇透析有活性无活性（二）一级结构与功能的关系1.一级结构相似的蛋白质功能相似一级结构不同的蛋白质功能不同胰岛素的一级结构及种属差异一级结构不同的蛋白质功能不同ACTH 促肾上腺素皮质激素MSH 促黑激素HbS与HbA的区别正常人：Glu患者：ValΒ-亚基第6位氨基酸由4个亚基组成血红蛋白功能:运输O2 二、蛋白质空间结构与功能的关系（一）肌红蛋白Mb与血红蛋白Hb蛋白质的空间结构决定生物学功能肌红蛋白（1个亚基）与血红蛋白（4个亚基）且一级结构有较大差异，但均具有与氧可逆地结合的能力其结构特点是，都与血红素（辅基）共价结合O2 （二）血红蛋白构象变化与结合氧的能力O2变构效应蛋白质分子与它的配体结合后构象发生变化,其功能也随之变化的现象,称为变构效应协同效应蛋白质分子中的1个亚基与其的配体结合后,能影响其它亚基与配体的结合,称为协同效应促进正协同效应抑制负协同效应血红蛋白与氧结合的正协同效应100% - MbHb氧饱和度静脉血动脉血P50氧分压第四节 蛋白质的理化性质一 、蛋白质的理化性质（一）两性解离和等电点COOHCOO-COO-PrPrPrNH3+NH3+NH2蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值+OH-+OH-+H++H+pHpIpH=pIpHpI等电点（pI）：在某一pH值溶液中，蛋白质酸性基团和碱性基团的解离程度相当蛋白质分子所带正负电荷相等，净电荷为零此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(pI)（二）蛋白质的胶体性质蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体蛋白质的胶体原因：表面形成水化层表面同种电荷的斥力蛋白质的聚沉（三）蛋白质的变性、沉淀与凝固1. 蛋白质的变性作用概念: 在某些理化因素作用下.蛋白质的构象被破坏，失去其原有的性质和生物活性，称为蛋白质的变性作用(denaturation) 变性后的蛋白称为变性蛋白质常见的变性因素：强碱、强酸、有机溶剂、化学因素生物碱、尿素、胍、重金属物理因素热、紫外线、超声波、剧烈振荡变性蛋白质的主要特征:（1）蛋白质分子中的次级键断裂,构象破坏，但不涉及共价键的破坏,一级结构不变（2） 生物活性丧失（3） 变性蛋白质的溶解度常降低、粘度增加、 扩散系数减小（4） 变性蛋白质容易消化蛋白质的复性(renaturation)除去变性因素后，有的变性蛋白质又可恢复其天然构象和生物活性，这一现象称为蛋白质的复性 蛋白质的沉淀(pre-cipitation)概念:当破坏了维持蛋白质胶体稳定的因素甚至蛋白质的构象时，蛋白质就会从溶液中析出，这种现象称为蛋白质的沉淀。应用:(1)蛋白质分离纯化(2)解毒(3)临床检验使蛋白质沉淀的方法(1) 盐析法( salting out)概念：向蛋白质溶液中加入大量中性盐使蛋白质沉淀称为盐析常用的中性盐：硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等作用原理:盐离子与水亲和力极强，夺去蛋白质的水化层，减少分子间静电斥力特点：不破坏蛋白质的构象，蛋白质不发生变性(2) 有机溶剂沉淀法使蛋白质脱去水化层,又能降低溶液的介电常数使蛋白质表面电荷减少，导致蛋白质分子聚集而沉淀 原理:常用有机溶剂:甲醇、乙醇、丙酮缺点：常会使蛋白质变性注意事项: 必须在低温下操作尽量缩短处理的时间 及时将蛋白质中残存的有机溶剂除去(3) 重金属盐沉淀法原理:重金属离子如Cu2+、Hg2+、Ag2+、Pb2+等带有正电荷，能与蛋白质分子中带负电的基团结合，生成不溶性的重金属蛋白盐而沉淀若溶液pH大于蛋白质的pI，沉淀更易发生缺点：此法常使蛋白质变性失活(4) 生物碱试剂和某些酸类沉淀法生物碱试剂(如鞣酸、苦味酸、钨酸等)，某些酸类(主要是指三氯醋酸、磺酰水杨酸和硝酸等)，与带正电的蛋白质 结合生成不溶性的盐而沉淀原理:缺点：常引起蛋白质变性反应溶液的pHpI，确保蛋白质以阳离子形式存在 注意事项:3. 蛋白质的凝固作用蛋白质的凝固作用实际上是蛋白质变性后进一步发展的不可逆结果如加热可使蛋白质变为不容再溶解的凝块二、 蛋白质的分离纯化(一) 盐析和有机溶剂沉淀(二) 电泳(三) 透析和超滤(四) 层析(五) 超速离心（二）电 泳概念：带电颗粒在电场