植物组织培养第四章胚胎培养和离体授粉.pptx

第四章 胚胎培养及离体授粉 ; 目的与要求 了解植物胚培养类型、过程、培养条件，以及胚培养的应用。了解植物胚乳培养过程和培养条件，了解胚乳培养在实践中的应用。认识植物胚珠和子房培养方法及其在生产上应用。 具备胚胎培养基本认知，有进行各类胚胎培养的基本能力。;一、胚胎培养概念 胚胎培养是将植物的胚胎与母体分离，培养在已知化学成分的培养基上。 二、胚胎培养应用： 1、解决育种中实践中遇到的问题； 2、研究胚胎发育过程中与胚发育有关的内外因素。 三、胚胎培养类型 幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养、子房培养;第一节 胚培养 一、培养类型 所谓胚培养就是采用人工方法把胚从种子、子房、胚珠中分离出来，放在无菌条件下让其进一步生长发育、以至形成幼苗的过程。 ;1、离体胚培养时期 自养期：能在基本的无机盐和蔗糖培养基上生长。 异养期：幼胚由胚乳及周围的组织提供养分。 2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养（子叶形成以后） ⑵幼胚培养（子叶形成之前） ;二、培养过程 1、幼胚培养过程 Hanning早在1904年就培养了萝卜和辣根菜的胚，发现离体胚可以充分发育，并且提前萌发形成小苗，这是世界上胚培养最早获得成功的一例。 幼胚培养的关键技术：取材时期 幼胚剥离 培养条件的控制 （是否需要特殊处理） ; 成熟或未成熟子房——70%酒精浸数S——0.1%升汞或饱和漂白粉浸10-30min——无菌水冲洗——剖出胚珠——取出完整胚——接种在培养基上。 一般采用固体培养法。（同时配制两种培养基） 培养条件： 20-30℃，2000Lx。10-14h;幼胚离体培养的生长发育方式； (1)胚性发育 胚只是在体积上增大甚至超过正常胚大小而不能萌发成苗。 (2)早熟萌发 幼胚不再发育，迅速萌发成幼苗。多数情况一个幼胚萌发成一个植株，有时因细胞分裂形成许多胚状体，进而形成许多植株，即丛生胚现象。 (3)愈伤组织 多数植物幼胚形成愈伤组织。再分化成胚状体或形成芽苗。;2、成熟胚培养过程 种子——95%酒精消毒——选取完好种子——70%酒精浸数S——0.1%升汞或10%次氯酸钠浸泡——无菌水冲洗——种子培养几天——剥离种胚——接种在培养基上。 培养条件： 黑暗培养、25℃;三、影响因素 （一）培养基 1、无机盐 成熟胚是含有根原基和茎原基以及一个或两个次生附属子叶。培养时进一步发育产生根和茎，此时在营养上相对独立，只需要提供简单的营养条件，在含有大量元素的无机盐和糖的培养基上即能生长。 幼胚则是异样的，要求更复杂的培养基。除了一般的无机盐成分外，还要加入微量元素和生长辅助物质，不同发育时期的幼胚对培养基成份要求不同，胚龄越小培养及成份越复杂。 ;2、糖类 幼胚需要蔗糖浓度较高 作用：调节培养基渗透压，作为碳源和能源，防止幼胚早熟萌发。 成熟胚2%，幼胚8-12%。培养过程中，转移到蔗糖水平低的培养基上。 3、氨基酸和维生素 加入氨基酸，能刺激胚的生长。加单一氨基酸时，以谷氨酰胺最好。 维生素对幼胚是必须的，对已萌发的胚，可能有抑制作用。;4、植物生长调节物质 成熟胚一般不需要外源激素就可萌发，但加入激素可显著增加培养物的生长，尤其对打破休眠。 幼胚培养的关键是使加入的生长调节剂和植物内源激素间保持某中平衡，以维持其胚性生长。 5、天然有机物 加入一些天然的胚乳或种子提取物，对离体胚生长有促进作用。 ;（二）培养条件 1、PH 5.2-6.0，水稻5.0,柑橘5.8 2、温度 25 -30 ℃左右 3、光照 黑暗或弱光 4、培养基形态 液体适合幼胚培养，固体适合成熟胚培养 ;（三）胚柄 胚柄是一个短命的结构，长在原胚的胚根一端，当胚达到球形期，胚柄发育到最大。 胚柄可参与幼胚的发育过程。一般胚柄较小，很难与胚一起剥离出来，所以培养的胚都不具备完整的胚柄。 在幼胚培养中，胚柄的存在对幼胚的存活是关键。因为胚柄的存在会显著刺激胚的进一步发育，在胚发育的心形期达到高潮。 没有胚柄存在时，一定浓度范围的KT可促进幼胚生长，但赤霉素作用更好。 ;四、胚培养的应用 1、远缘杂交中应用 2、克服珠心胚的干扰，提高育种效率 3、缩短育种周期 4、测定休眠种子的萌发率 5、理论研究中应用 ;胚珠及胚囊的发育 ;第二节 胚乳培养 胚乳培养—将胚乳从母体上分离出来，在无菌条件下人工培养，使其生长发育成为幼苗的过程。 ; 胚乳培养的最早研究始于1933年，Lampe和Mills首例进行了玉