蛋白质电泳技术.pptxVIP

会计学;影响电泳的环境因素;2. 分类;3. 电泳仪及附属设备;电泳槽 板状电泳槽 水平板 垂直板 管状电泳槽 *自由界面电泳槽;4.电泳的支持介质;5.检测-染色方法;三苯基甲烷衍生物，-SO3--蛋白质的碱性基团——染料-蛋白质复合物。 R型 G型二甲花青亮蓝-甲基取代的三苯基甲烷衍生物 染色 固定蛋白质-染色-脱色 同时固定和染色-脱色 脱色 30%甲醇的10%乙酸溶液等;二、琼脂糖凝胶电泳agarose gel electrophoresis;;三、醋酸纤维素薄膜cellulose acetate film;四、聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGE;1.聚丙烯酰胺凝胶polyacrylamide gel, PAG;;总浓度与交联度的影响;凝胶孔径;2. 连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(1959);3. 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳;不连续性 凝胶浓度：浓缩胶-分离胶 缓冲液离子成分 缓冲液pH 电位梯度;制胶;4. SDS;SDS;操作特点 样品: 制胶： 缓冲液：分离、浓缩胶缓冲液均含SDS 等 分子量的确定 染色 考马斯亮蓝-蛋白质吸附量-近似Beer定律 其他染色 计算标准蛋白质mR，作lgMr-mR标准曲线 待测蛋白mR - Mr;5. 梯度凝胶电泳;五、等电聚焦电泳isoelectric focusing IEF;获得pH梯度 人工pH梯度: 不稳定，可用于制备 自然pH梯度 载