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第 PAGE \* Arabic 5 页 专题二 微生物的培养与应用 课题一 微生物的实验室培养 一、培养基分类 培养基分类 划分标准 培养基类型 作用 物理性质 液体培养基 应用于工业或生活生产 半固体培养基 应用于微生物的分离和鉴定 固体培养基 常用于观察微生物的运动及菌种保藏等 成分 人工合成培养基 常用于微生物的分离鉴定 天然培养基 常用于实际工业生产 用途 选择培养基 抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长 鉴定培养基 根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物 二、培养基的成分 培养基成分 成分 作用 例子 水 碳源 为微生物的代谢提供碳元素的物质 如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源，异养微生物只能利用有机碳源 氮源 为微生物的代谢提供氮元素的物质 如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2 培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 三、无菌技术· 控制无菌的目的 控制无菌的操作 1.防止实验室的培养物被其他外来微生物污染2.有效避免操作者自身被微生物感染 ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 ·消毒与灭菌的区别 比较项 常用的方法 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 灼烧灭菌（用于接种环、接种针、试管口等）、干热灭菌（用于玻璃器皿、金属用具等）、高压蒸汽灭菌（用于培养基、无菌水等）、紫外线灭菌法（表面灭菌和空气灭菌等使用） 强烈 全部微生物 能 四、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 （2）倒平板操作的步骤： （3）倒平板操作的讨论 讨论问题 答案 1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 五、纯化大肠杆菌 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 操作步骤 ①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。③将试管口通过火焰。④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第 一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。⑧将平板倒置放入培养箱中培养。 1.稀释 ①将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按101到106的顺序进行编号。②用移液试管吸取1ml培养的菌夜，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移夜管上的橡皮，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。③从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第二步的混匀操作。以此类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移夜管需要经过灭菌。操作时，试管口和移夜管应在离火焰1~2cm处 2涂布平板： ①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少量菌液，滴加到培养基表面。③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面 目的 使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落（由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体），以便于纯化菌种 1.平板划线操作的讨论 讨论问题 答案 1.为什么在