高中生物第一部分微生物的利用实验2分离以尿素为氮源的微生物学案浙科版选修1.pdfVIP

实验 2 分离以尿素为氮源的微生物 [ 学考报告 ] 知识内容 考试属性 考情解读 1. 进行微生物分离。 使用含有尿素的培养基， 采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。 2. 使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌 的存在。 分离以尿素为氮源的微生物 加试 3. 说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原 理。 4. 举例说明本实验分离出来的细菌不一定都 是以尿素为氮源的细菌 一、以尿素为氮源的微生物 1. 尿素 又称脲， 是蛋白质降解的产物。 在人和其他哺乳动物如家畜的尿中都含有尿素， 植物不 能直接吸收尿素，因此大量尿素的存在将对环境造成污染。 2. 以尿素为氮源的微生物 这些细菌可以尿素为氮源， 是因为其含有脲酶， 通过降解尿素作为其生长的氮源。 其利 脲酶 用尿素的反应式为： (NH2 ) 2 C＝O＋H2O――→2NH3 ＋CO2 。 3. 分离以尿素为氮源的微生物所依据的原理 在氮源只有尿素时， 这些微生物能利用尿素获得氮源而存活； 而其他微生物却不能利用 尿素，最终因为缺乏氮源而死亡。 二、从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物实验 1. 实验目的 (1) 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离含有脲酶的细菌。 (2) 通过指示剂颜色的变化检知酶 ( 脲酶 ) 所催化的化学反应 ( 培养基 pH 的变化 ) 。 (3) 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量。 2. 实验原理 (1) 用选择培养基 ( 培养基类型 ) 可分离出以尿素为氮源的微生物。 (2) 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌产生的脲酶将培养基中的尿素分解成氨，使培 养基变碱， pH 升高，酚红指示剂变红。 1 (3) 根据培养基中的菌落数，可统计土壤样品中含有的这种微生物的数量。 3. 实验步骤 (1) 倒平板：在 60 ℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的 LB 固体培养基和尿素固体培养 基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固。 (2) 制备细菌悬浮液 －2 将土样 1 g ，在无菌条件下加到有 99 mL 无菌水的三角瓶中，振荡 10 min ，制成 10 －3 稀释液；从该稀释液中取 0.5 mL 悬液加到 4.5 mL 无菌水的三角瓶中，经振荡就制成 10 稀释液；再从 10－3 稀释液中取 0.5 mL 悬液加到 4.5 mL 无菌水的三角瓶中，经振荡就制成 － 4