宝宁丸对免疫功能影响论文.docVIP

宝宁丸对免疫功能影响论文 1材料与方法 1.1药物及制备 醋制鳖甲、银柴胡、生黄芪、生山药各10g，炒莱菔子、防风、炒枳实各4g，炒白术5g，炒麦芽、炒神曲、鸡内金各6g，由我校二附院中药饮片厂制剂教学科研基地按比例制成散剂。实验前浸泡24h（温度为0～4℃），过滤去渣取上清液，配成浓度为50g/L的溶液备用。 1.2动物清洁级昆明小鼠，由南阳医学高等专科学校实验动物中心提供，小鼠体质量18～22g，雄性，饲养于清洁级实验室内。 1.3血清抗体效价测定 1.3.1实验分组小鼠32只，按体质量配对后随机分为两组，宝宁丸组（B组）和对照组（C组）各16只，B组以50g/L的宝宁丸溶液灌胃，2次/d，C组以生理盐水灌胃，2次/d。 1.3.2血清抗体的诱导产生用100μg·ml-1牛血清白蛋白作为抗原在1,4,8周对小鼠腹腔注射，第1次注射剂量为0.3ml，第2次注射剂量0.4ml，第3次注射剂量0.5ml。 1.3.3取血尾静脉取血，用免疫双向扩散法测小鼠血清抗体效价。在1∶16以上时即达到要求，第9周时集体处死。处死前将小鼠禁食24h，以免血脂过高。用断头法处死小鼠，每只小鼠分别取血置于1ml离心管中。常温静置1h，4℃过夜，使血块收缩，将血块自容器壁分离，将血清全部倾入离心管。4℃下2500r/min离心30min，取上清部分与前面血清混合，3000r/min离心5min取上清液，即为所需血清。 1.3.4血清抗体效价测定准备10支试管，分别加入生理盐水0.5ml。在第1管内加小鼠血清0.5ml，混匀后吸出0.5ml注入第2管，同样混匀后吸出0.5ml于第3管，依此类推，稀释到第9管，第9管混匀后弃去0.5ml，第10管不加小鼠血清，只加0.5ml生理盐水。第1到第9管的稀释倍数分别为2，4，8，16，32，64，128，256，512倍。每管中再加入100μg·ml-1牛血清白蛋白0.5ml。混匀后室温放置60min，以出现明显凝集的试管的稀释倍数为血清抗体效价。 1.4小鼠腹腔巨噬细胞功能测定 1.4.1鸡红细胞悬液的制备［2］于无菌操作下，自鸡翼下静脉采血，置Alsever’’’’s溶液中，高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。临用时，用生理盐水洗涤3次，离心弃去上清液，用生理盐水配成20ml/L(V/V)。 1.4.2实验分组取小鼠30只，按体质量配对后随机分为宝宁丸组(B组)、卡介苗组(K组)和生理盐水组(C组)，每组各10只，分笼饲养。按表1给药。表1小鼠腹腔巨噬细胞功能测定动物分组及给药情况（略） 4周后，每鼠腹腔注射20ml/L(v/v)鸡红细胞悬液1.0ml。间隔30min，颈椎脱臼处死动物，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2.0ml，转动鼠板，吸出腹腔洗液1.0ml，平均分滴于2片载玻片上，移置(37±1)℃孵箱温育30min，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，40ml/L(V/V)Gimsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗，凉干。镜检，计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数，计算吞噬百分率和吞噬指数。计算公式为：吞噬百分率（%）＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞（吞及未吞的）×100%，吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/200个巨噬细胞（吞及未吞的）÷2。 2结果 2.1血清抗体效价通过对两组32管小鼠血清抗体效价的测定，得到B组血清中抗体效价明显高于C组。B组血清抗体效价以1∶128为主，占样本总量的62.50%；其次为1∶256，占样本总量的18.75%；再次为1∶64，占样本总量的12.50%，1∶512，占样本总量的6.25%。C组血清抗体效价以1∶32为主，占样本总量的56.25%；其次为1∶64，占样本总量的25.00%，再次为1∶16，占样本总量的18.75%(见表2)。此结果表明宝宁丸组的小鼠体液免疫功能高于对照组。表2宝宁丸组与对照组血清抗体效价对比（略） 2.2小鼠腹腔巨噬细胞功能实验表明，B组对鸡红细胞的吞噬百分率为71.35%，吞噬指数为1.31，K组的吞噬百分率为68.30%，吞噬指数为1.28，C组吞噬百分率为61.05%，吞噬指数为1.05（见表3）。B组、K组分别与C组进行统计学对照处理，宝宁丸、卡介苗均能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。表3各组玻片巨噬细胞计数、吞噬百分率及吞噬指数（略） 3讨论 遵照中医理论，宝宁丸中黄芪、白术为君，益气固表，健脾助运，此两味药配伍，其意在于“补虚黄芪为墙垣，以白术为基址……可至风