一种环状探针和基于环状探针捕获的测序文库构建方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 109252224 A (43)申请公布日 2019.01.22 (21)申请号 201710576708.5 (22)申请日 2017.07.14 (71)申请人 深圳华大基因股份有限公司 地址 518083 广东省深圳市盐田区洪安三 街21号华大综合园7栋7层-14层 (72)发明人 萧卓　刘华勇　袁剑颖　石先灯　 李英镇　 (74)专利代理机构 深圳鼎合诚知识产权代理有 限公司 44281 代理人 孙银行　彭家恩 (51)Int.Cl. C40B 50/06(2006.01) C12N 15/11(2006.01) 权利要求书1页 说明书14页 序列表6页 附图3页 (54)发明名称 一种环状探针和基于环状探针捕获的测序 文库构建方法 (57)摘要 一种环状探针和基于环状探针捕获的测序 文库构建方法，该方法包括：将环状探针与靶标 核酸退火杂交，其中环状探针为线性核酸探针， 其包括两个末端的特异性臂区和中间的通用序 列，其中特异性臂区用于与靶标核酸杂交，杂交 后探针的两个末端首尾相向，通用序列用于连接 两个末端的特异性臂区并作为通用引物的识别 区域；在聚合酶和连接酶的作用下，使环状探针 的3’末端以靶标核酸为模板进行扩增并与5’末 端连接形成环状分子；加入核酸外切酶将线性核 酸分子消化。本发明利用扩增原理，解决捕获效 A 率低和成本高昂的问题，利用环状探针解决引物 4 对数量有限的问题，利用通用引物扩增解决多重 2 2 2 扩增均一性差的问题。 5 2 9 0 1 N C CN 109252224 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种基于环状探针捕获的测序文库构建方法，其特征在于，所述方法包括： 将环状探针与靶标核酸退火杂交，其中所述环状探针为线性核酸探针，其包括两个末 端的特异性臂区和中间的通用序列，其中所述特异性臂区用于与所述靶标核酸杂交，杂交 后探针的两个末端首尾相向，所述通用序列用于连接两个末端的特异性臂区并作为通用引 物的识别区域； 在聚合酶和连接酶的作用下，使所述环状探针的3’末端以所述靶标核酸为模板进行扩 增并与5’末端连接形成环状分子；和 加入核酸外切酶将线性核酸分子消化。 2.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述通用引物是带有测序接 头的引物；所述核酸外切酶将线性核酸分子消化之后，加入所述通用引物进行PCR扩增。 3.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述通用引物是不带测序接 头的引物；所述核酸外切酶将线性核酸分子消化之后，加入所述通用引物进行PCR扩增；所 述PCR扩增之后，将扩增产物连接上测序接头； 优选地，所述扩增产物连接上测序接头之后，环化并通过滚环复制制备DNA纳米球。 4.根据权利要求1所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述核酸外切酶将线性核酸 分子消化之后，通过滚环复制制备DNA纳米球。 5.根据权利要求1至4任一项所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述环状探针的 两个末端的特异性臂区长度各自为15 30个碱基。~ 6.根据权利要求1至4任一项所述的测序文库构建方法，其特征在于，所述环状探针的 中间的通用序列长度从25个碱基到数百个碱基。 7.根据权利要求1至4任一项所述的测序文库构建方法，其特征在