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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 109486922 A
(43)申请公布日
2019.03.19
(21)申请号 201710805585.8
(22)申请日 2017.09.08
(71)申请人 深圳华大基因股份有限公司
地址 518083 广东省深圳市盐田区洪安三
街21号华大综合园7栋7层-14层
(72)发明人 宫艳萍 马珍子
(74)专利代理机构 深圳鼎合诚知识产权代理有
限公司 44281
代理人 孙银行 彭家恩
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6869(2018.01)
权利要求书1页 说明书7页
序列表2页 附图2页
(54)发明名称
一种基于单引物探针捕获检测微生物目标
序列的方法
(57)摘要
一种基于单引物探针捕获检测微生物目标
序列的方法，包括：将包含微生物目标序列的DNA
样本片段化，然后进行末端修复；将末端修复后
的DNA片段连接接头；使用单引物探针与靶序列
的探针结合位点退火并延伸以进行靶序列捕获，
其中探针结合位点位于靶序列的上游或下游，单
引物探针包括探针序列部分和位于探针序列部
分5’端的公共序列部分；使用一对通用PCR引物
对捕获的靶序列进行扩增；对扩增产物进行测序
分析。本发明的方法省去洗脱进行目的片段分
离，简化操作步骤，减少目的片段不必要的损失，
A 且杂交时间相对较短，适合快速检测需求；单引
2 物探针即可进行捕获，减少前期探针设计的复杂
2
9
6 度；扩增时采用公用引物去除不同引物富集产生
8
4
9 的不均一性。
0
1
N
C
CN 109486922 A 权 利 要 求 书 1/1页
1.一种基于单引物探针捕获检测微生物目标序列的方法，其特征在于，所述方法包括：
将包含微生物目标序列的DNA样本片段化，然后进行末端修复；
将末端修复后的DNA片段连接接头；
使用单引物探针与靶序列的探针结合位点退火并延伸以进行靶序列捕获，其中所述探
针结合位点位于所述靶序列的上游或下游，所述单引物探针包括探针序列部分和位于所述
探针序列部分5’端的公共序列部分，其中所述探针序列部分用于与所述探针结合位点退
火，所述公共序列部分用作通用PCR引物的结合位点；
使用一对通用PCR引物对捕获的靶序列进行扩增，得到扩增产物；
对所述扩增产物进行测序分析，获得目标序列的序列信息。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA样本片段化至150bp-300bp小片
段。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接头包含标签序列；
优先地，所述接头进一步包含一段随机序列，所述随机序列与所述标签序列相邻。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针序列部分的长度是35-40bp。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单引物探针经梯度退火与所述探针结
合位点结合。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度退火是从80℃开始梯度降温至60
℃。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接头的序列是SEQ ID NO：5和SEQ ID
NO：6。
8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序平台公共接头序列部分的序列
是SEQ ID NO：7。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序平台通用
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