一种用于新型冠状病毒及其变异株的数字PCR检测试剂盒发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113073150 A (43)申请公布日 2021.07.06 (21)申请号 202110488886.9 (22)申请日 2021.04.28 (71)申请人 领航基因科技（杭州）有限公司 地址 311227 浙江省杭州市萧山区南阳街 道横蓬园区红山工业区 (72)发明人 朱海涛　夏江　 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 陆惠中　田欢 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/686 (2018.01) C12N 15/11 (2006.01) 权利要求书1页 说明书9页 序列表3页 (54)发明名称 一种用于新型冠状病毒及其变异株的数字 PCR检测试剂盒 (57)摘要 本发明属于分子检测领域，尤其涉及一种用 于新型冠状病毒及其变异株的数字PCR检测试剂 盒。首先公开了一种用于同时检测新型冠状病毒 及其变异株的的引物探针组合物，所述新型冠状 病毒包括野生型及B.1.1.7变异株、B.1.351变异 株和P.1变异株变异株；针对N基因、ORF1ab基因 和S基因HV69‑70del、K417N、K417T、N501Y突变型 进行所述引物探针组合物设计。本发明开发了一 种新的多重数字PCR体系以及利用该PCR体系进 行新型冠状病毒及其变异株检测的试剂盒。该多 重数字PCR体系解决了现有的不同新型冠状病毒 A 变异株需要分次单独检测，过程繁琐的问题。 0 5 1 3 7 0 3 1 1 N C CN 113073150 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种用于同时检测新型冠状病毒及其变异株的的引物探针组合物，其特征在于，所 述新型冠状病毒变异株包括B.1.1.7变异株、B.1.351变异株和P.1变异株；针对N基因、 ORF1ab基因和S基因HV69‑70del、K417N、K417T、N501Y突变型进行所述引物探针组合物设 计。 2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括核苷 酸序列如SEQ  ID NO：1‑15所示的序列。 3.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1‑2所述的引物探针组合物。 4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核苷酸序列如SEQ  ID  NO：16‑18所示的内控基因检测序列。 5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述内控基因，通过采用血液/细胞/组 织基因组DNA提取试剂盒抽提口腔脱落细胞的基因组DNA得到内控基因。 6.一种同时检测多种新型冠状病毒变异株的方法，其特征在于，包括：使用权利要求2‑ 5所述的试剂盒进行检测。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，基于多重数字PCR平台进行检测。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)获得样本核酸； (2)配制数字PCR反应液； (3)制备液滴芯片； (4)运行液滴芯片扩增程序后，采用生物芯片阅读仪进行分析后报告输出。 9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述扩增程序依次包括：98℃预变性5min； 98℃变性15秒，55℃退火120秒，循环40次。 10.根据权利要求1‑2所述的引物探针组合物、权利要求3‑5所述的试剂盒和权利要求 6‑9所述的方法在分子检测领域的应用；优选的，所述分子检