醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告.pdf

前言 血清蛋白： 血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。 当身体需要能量或者需要建 造材料时，脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中 ，脂肪酸被血清蛋白 获取，并被运送到需要的部位。 牛血清白蛋白的相对分子质量为 10 的 4 次方这个级别，它不是 一定的，是多聚物，有的地方测的 70 000，这就是一个数据了。在做 PCR 的时候会用到它。 牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量 68kD 。等电点 4.8 。含氮 量 16%，含糖量 0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有 0.2% 。白 蛋白由 581 个氨基酸残基组成， 其中 35 个半胱氨酸组成 17 个二硫键， 在肽链的第 34 位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和 其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、 PH 缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白 蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。 醋酸纤维薄膜电泳： 醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。 它是纤维素的醋酸 酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中，即 可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以 0.1mm—0.15mm 为宜。太厚 吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。 应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广泛用于血 清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋 白，甲胎蛋白，类固醇 激素及同工酶等的分离分析中， 尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳 低，但它具有简单，快速等优点。 特点： 1. （1）醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少， 无 “拖尾 ”现象，染色 后背景能完全脱色， 各种蛋白质染色带分离清晰， 因而提高了测定的 精确性。 （2）快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小，薄膜中所容 纳的缓冲液也较少， 电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的， 所以分离速度快， 电泳时间短，一般电泳 45—60min 即可，加上染色， 脱色，整个电泳完成仅需 90min 左右。 （3 ）灵敏度高，样品用量少。 血清蛋白仅需 2 μl血清，甚至加样 体积少至 0.1 μl，仅含 5 μg蛋白样品也可得到清晰的分离带。临床医 学检验利用这一点，检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。 （4 ）应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋 白，溶菌酶，胰岛素，组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。 （5）醋酸纤维薄膜电泳染色后，经冰乙酸，乙醇混合液或其它溶 液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存。 2 、醋酸纤维薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，操作简单，但 分离效果不太好。 如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电泳中， 只能分离出 5—6 条区带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出数 10 条区带。 一、实验目的 1.掌握电泳法分离血清蛋白质的原理； 2.掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作方法。 二、实验原理 1.电泳：是指带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的 现象。 在一定 pH 条件下，不同的蛋白质由于具有不同的等电点而带 不同性质的电荷， 因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也 不同，即它们的电泳迁