生物 组织培养.pptVIP

* * 3、增强腋芽生枝能力 腋芽存在于幼叶叶腋中，即腋生分生组织，去顶后它们能代替顶芽发育成主干。每个腋芽都有发育成一个枝条的能力。传统扦插法也利用它进行无性繁殖。去除顶端优势，激发腋生分生组织与ＣＴＫ供给密切相关。组培中，把枝条培养在含CTK、GA和生长素等的培养基中，可增强腋芽生枝能力。结果形成的枝条又含有若干腋芽，腋芽再生枝条，这一过程多次重复，使原来的外植体形成一丛生枝。草莓以这种方式每两周可增殖10倍，其他植物每月５倍繁殖系数是常见的。 * * * （３）植物生长物质： A 生长素：主要用于诱导细胞的分裂（愈伤组织的形成）和根的分化。由于IAA氧化酶的存在，组培中常用NAA、IBA、2，4-D等人工合成的生长调节剂。生长素一般溶于95%酒精或0.1mol/LNaOH。 B 细胞分裂素：主要用于促进细胞分裂和由callus或器官上分化不定芽，也用于茎芽的增殖。常用有6-BA、KT、ZT等。一般溶于0.5-1.0mol/LHCl或稀薄的NaOH中。 * * * 配制时一定要注意：能产生沉淀的药品不能混溶，如Ｃa2＋和ＳＯ４２－。 * 植物组织培养 一、植物组织培养理论 1、植物组织培养 是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。 2、细胞全能性 指植物细胞具有该植物有机体的全部遗传信息，并具有形成植物有机体所有细胞类型，直至发育成完整植株的能力。 3、脱分化 在离体培养的条件下，已分化的细胞，失去原有的形态和机能，从而形成没有分化的无组织的细胞团或愈伤组织的过程。 4、再分化 由脱分化状态的细胞再度分化形成一种或几种类型细胞的过程。再分化可以包括细胞分化、组织分化和器官分化等。再分化可以通过胚胎发生途径或器官发生途径来实现。 （一）无菌培养物的建立 建立无菌培养物的三项技术： 外植体的选择 消毒 诱导培养 对于易褐变的外植体还要有防止褐变的措施。 1 2 3 二、组织培养的实验程序和技术要点 1、 外植体的选择 （1）遗传表型选择 （2）生理状态的选择：一般选年幼的、生长期、健壮的外植体，增殖能力强。 （3）取外植体的部位 （4）取外植体的季节和时间：一般再生能力仅限于营养生长时期 目前常用消毒方法： 首先70～75％酒精，30秒，表面杀菌， 后用其他消毒剂消毒； 如： 0.1％氯化汞，5～10分钟 2～5％次氯酸钠，5～30分钟 2、外植体的消毒 3、诱导培养 （1）外植体的切割 叶片0.5～0.8 cm2；茎段和顶芽以１cm长为宜。 （2）接种 形态学下端插入培养基（如带节茎段），叶平铺。 不可将切块深埋于培养基中，以防无氧呼吸。 （3）最佳培养基的筛选 主要因素：基本培养基 植物生长物质的种类、浓度和配比 （二）茎芽的增殖 1、通过愈伤组织再生途径获得不定芽 不定芽（adventitious buds ） 是指从非正常（叶腋和茎尖）出芽的位置 上诱导而形成的芽，如从根、叶和愈伤组织 中诱导的芽 。 不足：遗传不稳定性；再生能力会下降。 2、采用增强腋芽生枝能力途径获得丛生芽 含CTK、GA和生长素等的培养基，可增强枝条腋芽生枝能力，最终获得丛生芽。 优点：此途径开始速度慢，但经一个时期后，枝条数目 以对数增加； 此途径为茎尖培养，所以不发生基因型的变化。 （三）根的诱导培养 一般在增殖的芽长到１-２厘米时，即可转入生根培养基培养。 （四）再生植株的驯化与移栽 （一）培养基的种类 根据各种不同试验要求，在基本培养基 中附加一些物质，如各种植物生长物质 以及其它有机附加物（如椰乳、香蕉 汁、番茄汁、酵母提取物、麦芽等）。 包括大量元素和微量元素、维生素和 氨基酸，还有碳源和水。常见的有 MS、White、B5和N6等。 三、培养基及其配制 （1） 基本培养基 完全培养基 植物生长物质 生长素：主要用于诱导细胞的分裂（愈伤组 织的形成）和根的分化，如IAA，NAA， IBA，2,4－D。 细胞分裂素：主要用于促进细胞分裂和由愈 伤或器官上分化不定芽，也用于茎芽的 增殖，常用6-BA、KT、ZT。 （2） 根据培养基的物理状态分： 液体培养基和固体培养基 （3）根据培养基的无机盐分： 高盐(MS)、中盐(Miller)、低盐(White)培养基 （4）根据培养物分： 愈伤组织培养基、芽增殖培养基、生根培养基、 细胞培养基和原生质体培养基等 琼脂与ＰH值： 琼脂是由海藻得来的多糖类物质， 一般用0.7～1.0％。 PH一般为５～６