减毒鼠伤寒门氏菌介导的抗原递呈系统在肿瘤治疗性口服DNA疫苗及蛋白质疫苗制备中的应用.pdfVIP

减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的抗原递呈系统 在肿瘤治疗性IZl服DNA疫苗及蛋白质疫苗制备中的应用 摘要 治疗性疫苗能够打破免疫耐受并引起针对癌症细胞的长时程免疫反应，由于 疫苗给药途径与构建有效的抗原递呈系统是疫苗制备需要解决的关键性问题。减 毒 鼠伤寒沙 门氏菌作为癌症疫苗的载体能够将DNA从原核细胞传递至真核细 胞，并且能够选择性积聚在肿瘤组织。热休克蛋白70能够通过其多肽结合结构 域与抗原结合并与抗原递呈细胞表面的Hsp70受体作用，将抗原传递至抗原递 呈细胞。本论文的第一部分，我们构建了一种新型的低拷贝DNA疫苗，该疫苗 基于Hsp70．TAA复合物构建，并由减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株作为载体将 DNA运送至小 鼠体 内。口服该重组细菌疫苗能够诱发针对黑色素肿瘤细胞的 CTL 细胞 毒 性细胞 杀伤 作 用 并显著激 活T 细胞反应 。在肿瘤 预 防实验 组 C57BL ／6J小鼠模型中，该治疗性口服疫苗能够诱发57．1％的肿瘤预防免疫反应， 在肿瘤治疗组中，该疫苗能够完全消除62．5％的C57BL ／6J小鼠中B16F10肿瘤 的生长，显著延长小鼠的生存期。 口服减毒沙门氏菌疫苗载体通常定位在吞噬性细胞中，限制了其所携带的抗 原蛋白进入抗原递呈途径，论文的第二部分我们利用沙门氏菌III型分泌系统对蛋 白质的转运功能来克服这种限制。IⅡ型分泌蛋白能够将沙门氏菌编码的抗原蛋 白直接运送至抗原递呈细胞胞质。抗原递呈细胞表面存在Hsp70的特异性受 体，故Hsp70能够 以Hsp70一TAA复合物的形式向APC细胞递呈抗原。本研 究利用III型分泌系统来实现对Hsp70．TRP2融合抗原蛋白的转运和递呈。口服 该重组细菌疫苗能够实现对肿瘤特异性抗原的有效递呈，打破免疫耐受，诱导产 生肿瘤细胞特异性的CTL反应和NK细胞杀伤作用，并在C5713L ／6J小鼠上建立 的B16F10黑色素肿瘤模型中获得了75％的肿瘤预防效果和62．5％的治疗效 果。我们设计了以减毒鼠伤寒沙门氏菌作为肿瘤DNA疫苗及蛋白疫苗的传递工 具的两套抗原递呈系统，为肿瘤的预防和治疗提供了有效的新方法。 关键词：治疗性疫苗，减毒鼠伤寒沙门氏菌，口服抗原递呈平台，低拷贝DNA 疫苗，沙门氏菌IⅡ型分泌系统，黑色素肿瘤 Development of therapeutic DNAvaccine and protein vaccine using orally delivered antigen presentation system mediated by attenuatedSalmonella typhimurium Abstract Therapeutic vaccines of cancer are attractive for their capacity of breaking the immune tolerance and invoking long-term immune response targeting cancer cells without autoimmunity．An efficient antigen delivery system is the key issue of developing an effective cancer vaccine．Attenuated Salmonella typhimurium as the carrier of cancer vaccine are able to transfer DNA from the prokaryote to the eukaryote and preferentially replicate within the tumor tissue．Heat shock protein 70 delivers the tumor-associated antigens to antigen presenting ceils via its domain and breaks immunetolerance of the cancer cells．Here in polypeptide-binding the fi