沙门氏菌的检测最新PPT课件.pptVIP

? 1. 三糖铁 (TSI) 试验 自选择性琼脂平板上分别挑取两个以上典型或可疑菌落，接 种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再底层穿刺，用一空白培养基 作对照试验。 ? 2 赖氨酸脱羧酶试验： 接种三糖铁琼脂的接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶 试验培养基和营养琼脂平板， ? 于 36 ± 1 ℃ 培养 18 ～ 24h ，必要时可延长至 48h 。 三糖铁（ TSI ）琼脂试验 ? 培养基： 乳糖：蔗糖：葡萄糖 =10 ： 10 ： 1 ；加有酚红 ? 本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产 生硫化氢（变黑）。 ? 原理： 只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解 产酸 可使 斜面先 变黄 ，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而 氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成 碱性 产物， 故使斜面后来又 变红 ，底部由于是在厌氧状态下，酸类 不被氧化，所以仍保持黄色。 33 三糖铁 (TSI) 试验 ? 测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的分解和产硫化氢情况 : 不分解乳糖、蔗糖，分解葡萄糖 √ √ 不产酸，碱性 粉红色（ - ） ； 产酸 黄色（ + ） ； 产生 H 2 S 黑色 （ + ）； 不产生 H 2 S （ - ） 。 思考题 产生硫化氢，应该是几号？ ? 1. 志贺菌属 都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多数不发酵乳糖，不 ? 2. 大肠杆菌 ，能分解葡萄糖，产酸产气，大多数能分解乳糖，不产 生硫化氢，应该是几号管？ ? 3. 沙门氏菌 能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生硫化氢，多说 产气，应该是几号管？ 赖氨酸脱羧酶试验 (1) 原理： 某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成 胺和二 氧化碳 。胺使培养基变为 碱性，可用指示剂指 示出来。 (2) 方法：将待检菌分别接种于 1 支赖氨酸脱羧酶试验管和 1 支对照 管，各覆盖至少 0.5cm 高度的无菌石蜡油， 35 ℃ 孵育 1~4d ，观 察结果。 (3) 结果 ：若为溴甲酚紫指示剂，阳性试验管培养初期（ 10 — 12h ） 因发酵葡萄糖 产酸变黄 ，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而 使培养基 由酸变碱 ，故又 由黄变为紫色 。阴性试验管则始终呈 黄色。对照管应为黄色。 37 3 进一步生化试验： ? 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同 时，接 种蛋白胨水 ( 供做靛基质试验 ) 、尿素琼脂 (pH7.2) 、氰化钾 (KCN) 培养基及对照培养基各 1 管。 ? 于 36 ± 1 ℃ 培养 18 ～ 24h ，必要时可延长至 48h ? 3. 吲哚试验 ( indol test) ? 细菌产生 色氨酸酶 ，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛 基质（吲哚） ，靛基质与试剂对 二甲基氨基苯甲醛 作用， 生成 玫瑰靛基质 。 色氨酸 → 吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛 → 玫瑰吲 哚（红色， + 大肠杆菌 ） 不产吲哚（无色， - 产气杆菌） ? 试验方法：取培养 24h 培养液，先加入少量乙醚，摇动 试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿 试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为 阳性。 ? 应用：用于肠道杆菌的鉴定 39 一、实验目的 ? 1. 掌握沙门氏菌属的检测方法 ? 2. 了解沙门氏菌的基本生化反应及原理 二、实验器材 ? 1. 菌种 ：沙门氏菌、大肠杆菌 ? 2. 检样 ：鲜鸡蛋 ? 3. 培养基 ：四硫磺酸钠黄绿（ TTB ）增菌液；氯化镁孔雀 绿增菌液（ MM) ；亚硒酸盐胱氨酸（ SC ）增菌液；亚硫酸 铋（ BS ）琼脂； HE 琼脂； SS 琼脂；三塘铁琼脂（ TSI ） ? 4. 设备： 冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、 无菌锥形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、无菌试管、无菌毛 细管 1. 四硫磺酸钠黄绿（ TTB ）增菌液 ? 基础液 900 mL ? 硫代硫酸钠溶液 100 mL ? 碘溶液 20.0 mL ? 煌绿水溶液 2.0 mL ? 牛胆盐溶液 50.0 mL ? 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每 加入一种成分，均应摇匀后再加入另 ? 一种成分。 基础液 ? 蛋白胨 10.0 g 蒸馏水 1 000 mL ? pH 7.0 ± 0.2 牛肉膏 5.0 g ? 氯化钠 3.0